ルテオリンはFRAT1遺伝子の発現を調節することでケロイド線維芽細胞の増殖とアポトーシスに影響を与える

Luteolin affects keloid fibroblast proliferation and apoptosis by regulating FRAT1 gene expression.

• Xueyan Zhang
• Wen Liu
• Shuxiang Wei

抄録

今回の実験では、ルテインがFRAT1遺伝子の発現を調節することでケロイド線維芽細胞の増殖やアポトーシスに影響を与えるかどうかを調べた。ケロイド線維芽細胞を異なる濃度でルテオリンで処理した。MTT法、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、リアルタイム定量PCR（qPCR）を用いて、細胞増殖、サイクリンD1（CyclinD1）、p21、B細胞リンパ腫・白血病2（Bcl-2）、Bcl-2関連Xタンパク質（Bax）、FRAT1タンパク質発現、アポトーシス、ARHI mRNA発現を検出した。ケロイド線維芽細胞をsi-FRAT1、またはpcDNA-FRAT1をトランスフェクトし、ルテオリンで処理し、細胞増殖およびアポトーシスにおける役割を観察した。ルテオリンは対照群と比較して、ケロイド線維芽細胞の活性、CyclinD1、Bcl-2、FRAT1タンパク質レベルを有意に低下させ、細胞のアポトーシス率、p21、Baxタンパク質発現を明らかに改善した（P<0.05）。また、ケロイド線維芽細胞におけるFRAT1 mRNAおよびタンパク質の発現は大幅に増加した(P<0.05)。FRAT1の発現を阻害すると、ケロイド線維芽細胞の24時間後、48時間後、72時間後の細胞生存率、CyclinD1、Bcl-2タンパク質発現が明らかに低下し、一方で、細胞のアポトーシス、p21、Baxタンパク質発現が劇的に増加した(P<0.05)。FRAT1過剰発現は、ケロイド線維芽細胞活性、FRAT1、CyclinD1、Bcl-2タンパク質発現、アポトーシス、p21、Baxタンパク質発現の促進に対するルテオリンの抑制効果を逆転させた。ルテオリンはFRAT1遺伝子の発現を調節することで、ケロイド線維芽細胞の増殖を抑制し、アポトーシスを誘導することができます。

The current experiment was performed to investigate whether luteolin affects the proliferation and apoptosis of keloid fibroblasts by regulating the expression of FRAT1 gene. Keloid fibroblasts were treated with luteolin at different concentrations. MTT method, western blot, flow cytometry, and real-time quantitative PCR (qPCR) were used to detect cell proliferation, cyclin D1 (CyclinD1), p21, B-cell lymphoma / leukemia-2 (Bcl-2), Bcl-2 related X protein (Bax), FRAT1 protein expression, apoptosis and ARHI mRNA expression. Keloid fibroblasts were transfected with si-FRAT1, or pcDNA-FRAT1 and treated with luteolin to observe their roles in cell proliferation and apoptosis. Compared with the control group, luteolin significantly reduced the keloid fibroblast activity, CyclinD1, Bcl-2, and FRAT1 protein levels, and obviously improved the cell apoptosis rate, p21 and Bax protein expression (P&lt;0.05). The expression of FRAT1 mRNA and protein in keloid fibroblasts was greatly increased (P&lt;0.05). Inhibition of FRAT1 expression evidently decreased cell viability at 24 h, 48 h, and 72 h, CyclinD1, and Bcl-2 protein expression of keloid fibroblasts, while-dramatically enhanced cell apoptosis, p21, and Bax protein levels (P&lt;0.05). FRAT1 overexpression reversed the inhibitory effect of luteolin on keloid fibroblast activity, FRAT1, CyclinD1, and Bcl-2 protein expression, and promotion of apoptosis, p21 and Bax protein expression. Luteolin can inhibit the proliferation and induce apoptosis of keloid fibroblasts by regulating the expression of FRAT1 gene.