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鈍目鯛（Megalobrama amblycephala）の肝細胞に対する酵母加水分解物の抗酸化能と免疫調節効果の評価
Evaluation of antioxidant capacity and immunomodulatory effects of yeast hydrolysates for hepatocytes of blunt snout bream (Megalobrama amblycephala).
PMID: 32540503 DOI: 10.1016/j.fsi.2020.06.019.
抄録
酵母加水分解物(YH)の抗酸化能と自然免疫に対する効果を調べるために、インビトロ試験を実施した。魚の初代肝細胞を3×10cells mLの密度で6ウェル組織培養プレートに播種し、以下の2種類の培地で処理した。1）DMEM/F12培地（コントロール）、および2）YH培地[DMEM/F12+0.1gL YH]を含む2種類の培地で処理した。24時間培養後、培地と初代肝細胞を回収し、その後の分析を行った。その結果、YHのアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）、乳酸脱水素酵素（LDH）活性および尿素窒素（UN）濃度に対する効果は有意ではなかった（P>0.05）。しかし、YH処理した肝細胞では、対照と比較して有意に（P<0.05）高いALTおよびAST活性が認められた。さらに、YH添加はスーパーオキシドディスムターゼ（SOD）、カタラーゼ（CAT）、代替補体経路（ACH50）、グルタチオンペルオキシダーゼ（GPX）活性の有意な増強とマロンジアルデヒド（MDA）濃度の低下をもたらしました。さらに、YHの適用は肝細胞においてSOD、CAT、NOX2遺伝子の発現を上昇させ、Keap1、Nrf2、Bach1のmRNAレベルを低下させた。また、YH 投与群では、対照群に比べてリゾチーム活性やアルブミン濃度が顕著に上昇した。さらに、抗菌ペプチド1（Leap1）やLeap2などの免疫関連遺伝子の発現は、YH添加により有意に上昇した。また、YHを投与した肝細胞では、NADPHオキシダーゼ2（NOX2）、Kelch-like-ECH-associated protein 1（Keap1）、NF-E2関連因子2（Nrf2）、BTBおよびCNCホモログ1（Bach1）の発現が低下していた。結論として、YHの補給は、鈍目鯛肝細胞の抗酸化能と自然免疫を改善した。
An in-vitro study was carried out to examine the effects of yeast hydrolysate (YH) on antioxidant capacity and innate immunity of blunt snout bream (Megalobrama amblycephala) hepatocytes. Fish primary hepatocytes were seeded at a density of 3 × 10 cells mL in 6-well tissue culture plates and treated with two different media including: 1) DMEM/F12 medium (control), and 2) YH medium [DMEM/F12 + 0.1 g L YH]. After incubation for 24 h, the culture medium and primary hepatocytes were collected for subsequent analyses. The results showed no significant (P > 0.05) effect of YH on aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and lactate dehydrogenase (LDH) activities and urea nitrogen (UN) concentration in conditioned medium. However, significantly (P < 0.05) higher ALT and AST activities were found in YH treated hepatocytes compared to control. Moreover, YH supplementation led to significant enhancement of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), alternative complement pathway (ACH50) and glutathione peroxidase (GPX) activities and reduction of malondialdehyde (MDA) concentration in conditioned medium. Furthermore, YH application upregulated the expression of SOD, CAT and NOX2 genes and downregulated mRNA levels of Keap1, Nrf2 and Bach1 in hepatocytes. Also, markedly higher lysozyme activity and albumin concentration were found in conditioned medium of YH group compared to the control. Additionally, expression of immune-related genes such as antimicrobial peptides 1 (Leap 1) and Leap 2 were significantly upregulated by YH supplementation. Down-regulated expression of NADPH oxidase-2 (NOX2), Kelch-like-ECH-associated protein 1 (Keap1), NF-E2-related factor 2 (Nrf2) and BTB and CNC homolog 1 (Bach1) were observed in YH treated hepatocytes. To conclude, YH supplementation improved antioxidant capacity and innate immunity of blunt snout bream hepatocytes.
Copyright © 2020. Published by Elsevier Ltd.