ヒトリンパ球におけるシングルコピーDNAの検出のためのフローサイトメトリーアッセイ

Flow cytometry assay for the detection of single-copy DNA in human lymphocytes.

• Naoki Uno
• Norihito Kaku
• Yoshitomo Morinaga
• Hiroo Hasegawa
• Katsunori Yanagihara

抄録

特定の核酸配列は、in situ ハイブリダイゼーションによって個々の細胞内で検出することができます。しかし、細胞あたりに標的配列のコピーが非常に少ない場合、そのシグナルはフローサイトメトリーでは検出できない。in situハイブリダイゼーションのために蛍光シグナルを増加させるための様々なアプローチが開発されているが、特定のゲノムDNA配列のフローサイトメトリーによる検出は確立されていない。ここでは、ユニバーサルエネルギー移動標識プライマーを用いたin situ PCRを用いて、ヒトリンパ球中のシングルコピーゲノム配列を検出するためのフローサイトメトリーアッセイを紹介する。

Specific nucleic acid sequences can be detected in individual cells by in situ hybridization. However, when very few copies of a target sequence are present per cell, its signal is undetectable by flow cytometry. Although various approaches have been developed to increase fluorescence signals for in situ hybridization, flow cytometric detection of specific genomic DNA sequences has not been established. Here, we present a flow cytometry assay for detection of single-copy genomic sequences in human lymphocytes using in situ PCR with universal energy transfer-labelled primers.

© The Author(s) 2020. Published by Oxford University Press on behalf of Nucleic Acids Research.