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ストライプドキャットフィッシュ（Pangasianodon hypophthalmus）の頭部腎臓白血球に対するPhyllanthus amarusとPsidium guajavaの抽出物、画分および純粋な化合物の免疫調節能
Immunomodulatory potential of extracts, fractions and pure compounds from Phyllanthus amarus and Psidium guajava on striped catfish (Pangasianodon hypophthalmus) head kidney leukocytes.
PMID: 32544554 DOI: 10.1016/j.fsi.2020.05.051.
抄録
本研究では、Psidium guajava L.とPhyllanthus amarus Schun and Thonnの生エタノール抽出物とその画分の、シマナマズ（Pangasianodon hypophthalmus）頭腎臓白血球（HKLs）に対する免疫調節効果を比較するとともに、主要なファイトケミカル成分を同定することを目的とした。さらに、P. amarus粗抽出物とそのヘキサン画分の主要成分であるヒポフィランチン、P. guajava粗抽出物に含まれるコロゾール酸、ウルソール酸、オレアノール酸、エチルなどの純粋な成分についても、これらの細胞への影響を調べた。guajava粗抽出物、酢酸エチル画分およびジクロロメタン画分で同定された他のテルペン誘導体、およびguajaverinとavicularinは、LC-UV-MSによりP. guajava粗抽出物およびその酢酸エチル画分で他のフラボノイドと同定された。抽出物（10, 20, 40μg/mL）または純粋化合物（7.5, 15, 30μM）で24時間刺激した後、HKLの細胞生存率、呼吸バーストアッセイ（RBA）、一酸化窒素合成酵素（NOS）およびリゾチーム活性を分析した。その結果、両抽出物のヘキサン画分はHKLの生存率を抑制し、他の画分は細胞の生存率を高めることがわかった。すべてのP. guajava画分は、すべての濃度または一部の濃度で、HKLsのRBA産生を大幅に増強した。同様に、NOS産生もまた、一部または全ての濃度のP. guajavaジクロロメタンおよび酢酸エチル画分によって有意に増加した。しかし、酢酸エチル画分と両植物の水性画分で処理したHKLでは、NOS産生は用量依存的に抑制された。また、P. guajava粗抽出物およびその有機溶媒画分で処理した細胞のリゾチーム活性は、P. amarusで処理した細胞のリゾチーム活性よりも強かった。コロソール酸、グアジャベリン、ウルソール酸、ヒポフィランチンを含む純粋な化合物は、濃度と化合物の種類に応じてHKLsの生存率を阻害した。アビキュラリンを除くすべての純粋な化合物は、ある濃度またはすべての濃度で、HKLsのRBA産生および/またはリゾチーム活性を有意に刺激した。NOS産生は、オレアノール酸（30μM）とヒポフィランチン（7.5μM）で処理したHKLでは有意に減少したが、ヒポフィランチンでは30μMで増加した。これらの結果から、P. guajavaとP. amarusの粗エタノール抽出物、それらの画分、および純粋な成分の一部は、ある濃度で免疫調節剤として作用する可能性があり、水産科学分野での貴重な候補となる可能性があることが明らかになった。
This study aimed to identify major phytochemical constituents, as well as compare the immunomodulatory effects of Psidium guajava L. and Phyllanthus amarus Schun and Thonn crude ethanol extracts and their fractions on striped catfish (Pangasianodon hypophthalmus) head kidney leukocytes (HKLs). Moreover, pure constituents were also investigated for their effects on those cells: hypophyllanthin, identified as a major constituent of P. amarus crude extracts and its hexane fraction; corosolic acid, ursolic acid, and oleanolic acid, identified in P. guajava crude extract, ethyl acetate and dichloromethane fractions; with other terpenic derivatives, as well as guajaverin and avicularin, identified with other flavonoids by LC-UV-MS in the crude P. guajava extract and its ethyl acetate fraction. Cell viability, respiratory burst assay (RBA), nitric oxide synthase (NOS) and lysozyme activity in HKLs were analyzed after 24 h stimulation with each extract (10, 20 and 40 μg/mL) or pure compound (7.5, 15 and 30 μM). Our results show that the hexane fraction of both plant extracts inhibited the viability of HKLs, while several other fractions enhanced the cell viability. All P. guajava fractions at all or some concentration considerably enhanced the RBA production in HKLs. Similarly, NOS production was also significantly increased by some or all concentrations of P. guajava dichloromethane and ethyl acetate fractions. However, the NOS production was dose-dependently inhibited in HKLs treated with Pa ethyl acetate and both plants aqueous fractions at 10 or 10 and 40 μg/mL respectively. The lysozyme activity in cells treated with P. guajava crude extracts and all its organic solvent fractions were stronger than those in P. amarus treatments. Pure compounds including corosolic acid, guajaverin, ursolic acid, hypophyllanthin inhibited the HKLs viability according to concentration and type of compound. All pure compounds except avicularin significantly stimulated, at certain or all concentrations, the RBA production and/or the lysozyme activity in HKLs. The NOS production was significantly reduced in HKLs treated with oleanolic acid (30 μM) and hypophyllanthin (7.5 μM) while its level was increased by hypophyllanthin at 30 μM. These results highlighted that the crude ethanol extracts of P. guajava and P. amarus, their fractions and some of their pure components at certain concentrations can potentially act as immunomodulators, and could be considered as valuable candidates in fishery sciences.
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