組織プラスミノーゲンアクチベーター（t-PA）の神経内分泌標的化

Neuroendocrine Targeting of Tissue Plasminogen Activator (t-PA).

• Robert J Parmer
• Yun Gong
• Seung Hyun Yoo
• Lindsey A Miles

抄録

t-PAは、交感神経系のクロマフィン細胞で顕著に発現するなど、神経内分泌系に広く分布しています。クロマフィン細胞のt-PAはカテコールアミン貯蔵小胞に選別され、交感神経の活性化に応答してカテコールアミンと共放出されることから、カテコールアミン貯蔵小胞がt-PAの迅速な放出のための貯蔵庫として機能する可能性が示唆される。クロモグラニンA（CgA）は、神経内分泌系全体の分泌小胞の主要なコアタンパク質であり、制御された分泌経路へのタンパク質のターゲティングにおいて重要な役割を果たしている可能性があり、制御された分泌小胞に運命づけられた他のタンパク質が結合し、トランスゴルジネットワーク（TGN）で構成的に分泌されたタンパク質から分離される凝集した「グラニン」複合体を形成することにより、制御された分泌経路へのタンパク質のターゲティングに重要な役割を果たしている。このような複合体の形成は、TGNの条件（低pH、高Ca）によって促進される。我々は、t-PAがCgAと特異的に相互作用し、この相互作用がTGNの条件下で増強されるという仮説を検証した。固定化した t-PA を I-CgA とインキュベートした。t-PA は CgA と特異的かつ飽和的に相互作用し、その相互作用はドメイン特異的で、t-PA の EGF/finger および kringle 1 ドメインと CgA 内の特異的な内部親水性ドメイン（KERTHQQKKHSSYEDELSEVL）によって媒介され、抗体およびペプチド競合研究によって評価された。ｔ-ＰＡと凝集したＣｇＡ複合体との相互作用は、ｔ-ＰＡの標的化および神経分泌細胞からの放出において役割を果たしている可能性がある。これらの結果は、正常な生理学的条件と脳虚血を含む病理学的条件の両方において、局所的な神経分泌細胞プラスミノーゲン活性化の調節に幅広い意味を持つ可能性がある。

t-PA has a widespread neuroendocrine distribution including prominent expression in chromaffin cells of the sympathoadrenal system. Chromaffin cell t-PA is sorted into catecholamine storage vesicles and co-released with catecholamines in response to sympathoadrenal activation, suggesting that catecholamine storage vesicles may serve as a reservoir for the rapid release of t-PA. Chromogranin A (CgA), a major core protein in secretory vesicles throughout the neuroendocrine system, may play a crucial role in targeting proteins into the regulated secretory pathway, by forming aggregated "granin" complexes to which other proteins destined for the regulated secretory vesicle bind and become separated from constitutively secreted proteins in the trans-Golgi network (TGN). Formation of such complexes is facilitated by conditions of the TGN (low pH, high Ca). We tested the hypothesis that t-PA interacts specifically with CgA and that this interaction is enhanced under conditions of the TGN. Immobilized t-PA was incubated with I-CgA. t-PA interacted specifically and saturably with CgA and the interaction was domain-specific, mediated by the EGF/finger and kringle 1 domains of t-PA and by a specific internal hydrophilic domain within CgA (KERTHQQKKHSSYEDELSEVL) as assessed by antibody and peptide competition studies. The interaction of t-PA with aggregated CgA complexes may play a role in the targeting of t-PA and its release from neurosecretory cells. These results may have broad implications for the regulation of local neurosecretory cell plasminogen activation under both normal physiological conditions and pathological conditions including cerebral ischemia.