エプスタインバーウイルスベースのプラスミド発現系を用いた哺乳類細胞におけるsiRNAの延長発現

Prolonged siRNA expression in mammalian cells using an Epstein-Barr virus-based plasmid expression system.

• Yan Wu
• Tianqiang Song
• Peipei Chen
• Xiaohong Jiang
• Qiang Wang
• Qihan Chen

抄録

RNA干渉（RNAi）は、遺伝子機能解析や疾患治療、特に古典的な小分子による「治療不可能」な疾患において強力なツールである。しかし、持続時間の短さや毒性のある副作用など、いくつかの欠陥があるため、RNAiの応用は限られている。RNAi応用を改善するための新しい戦略がまだ必要とされている。これまでの研究では、エプスタインバーウイルス核抗原１（ＥＢＮＡ-１）およびプラスミド複製の起源（ｏｒｉＰ）が、ＥＢＶ潜伏遺伝子発現のための重要な因子であり、ＥＢＶゲノムの複製を比較的長い間、染色体外要素として維持することができることが示されてきた。本研究では、オリプとEBNA-1をベースにしたプラスミド発現系を開発し、哺乳類細胞内でタンパク質と短干渉RNA(siRNA)を長時間発現させることに成功した。本研究は、遺伝子機能の解析以外にも、持続的な効果を必要とするタンパク質やRNAiを用いた治療法の新たな選択肢と実用性を提供するものである。

RNA interference (RNAi) is a powerful tool in gene function analysis and disease treatment, especially diseases that are 'undruggable' by classical small molecules. However, the RNAi applications are limited due to some defects, such as short duration and toxic side effects. New strategies are still needed to improve RNAi applications. Previous studies have illustrated that Epstein-Barr virus nuclear antigen 1 (EBNA-1) and the origin of plasmid replication (oriP) are critical factors for EBV latent gene expression, which can keep the replication of the EBV genome as an extrachromosomal element for a relatively long time. Here we report a plasmid expression system on the base of oriP and EBNA-1, which could produce protein as well as short interfering RNAs(siRNAs) for a long time in mammalian cells. siRNA expression mediated by this system causes efficient and specific down-regulation of gene expression. Except for analyzing gene function, this study also provided a new optional and practical way for protein and/or RNAi-based therapies that require enduring effect.

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