予防的鎮痛のための新しいジブカイン製剤の前臨床評価

Pre-clinical evaluation of new dibucaine formulations for preventive analgesia.

• Beatriz Furlan
• Beatriz T de Melo
• Juliana Z B Papini
• Marcelo Sperandio
• Juliana D Oliveira
• Eneida de Paula
• Cintia M S Cereda
• Giovana R Tofoli

抄録

我々は以前、ジブカインをカプセル化するための硫酸アンモニウム勾配担持リポソームを開発した。本研究の目的は、これまでに開発されたジブカイン（DBC）のイオン性リポソーム製剤の前臨床試験における安全性と有効性を評価することであった。有効性は、プレーンDBCまたはリポソームDBC（DBC）を投与されたWistarラット（n=8）を対象に評価した。コントロールとして空のリポソーム（DBCなし）または生理食塩水も使用した。坐骨神経ブロックは、製剤または対照（0.4mL）を用いて行った。von Freyフィラメントによる機械的過敏性を評価するために、後足切開ベースの術後疼痛モデルを使用した。抗炎症活性を確認するために，切開後1時間および6時間後の後足組織において，TNF-α，IL-1β，サブスタンスPおよびCGRPのタンパク質レベルをELISA法により測定した。薬物の安全性を確認するために、坐骨神経シュワン細胞培養物を上記の製剤で処理し、細胞生存率（MTTアッセイ）および細胞死（フローサイトメトリーアッセイ）を評価した。坐骨神経領域を取り囲む組織の病理組織学もまた、処置の２日後および７日後に評価した。すべての動物は切開後の過敏症を呈し、DBCはより長い鎮痛効果を示した（<0.001）。DBCはTNF-αとCGRPレベルを減少させた（<0.05）。病理組織学的評価では、対照リポソームを投与した場合、DBCと比較してより大きな炎症反応が認められた（<0.05）。シュワン細胞の生存率、死滅率には、プレーンとカプセル化されたDBCの間に差はありませんでした。DBCは安全性が高く、硫酸アンモニウムの勾配をつけたリポソームからのジブカインの放出が遅いため、麻酔時間が延長された。

We have previously developed ammonium sulphate gradient loaded liposomes to encapsulate dibucaine. Thus, the purpose of this study was to evaluate the pre-clinical safety and effectiveness of this novel ionic liposomal formulation of dibucaine (DBC), as described in previous work. Effectiveness was evaluated on Wistar rats (n = 8) that received plain DBC or liposomal DBC (DBC). Control empty liposomes (without DBC) or saline were also used as control. Sciatic nerve block was performed using the formulations or controls (0.4 mL). A hindpaw incision-based postoperative pain model was used to evaluate mechanical hypersensitivity with von Frey filaments. To verify antiinflamatory activity protein levels of TNF-α, IL-1β, substance P and CGRP were measured by ELISA in the hindpaw tissue after 1 and 6 hours of the incision. To corroborate drug safety, sciatic nerve Schwann cell cultures were treated with the aforementioned formulations and assessed for cell viability (MTT assay) and death (flow cytometry assay). Histopathology of the tissues surrounding the sciatic nerve region was also assessed 2 and 7 days after treatment. All animals presented post incisional hypersensitivity and DBC showed longer analgesic effect ( < 0.001). DBC reduced TNF-α and CGRP levels ( < 0.05). Histopathological evaluation showed greater inflammatory reaction after the administration of control liposomes when compared to DBC ( < 0.05). There was no difference in Schwann cell viability and death between plain and encapsulated DBC. DBC was safe and enhanced anaesthesia duration due to slow release of dibucaine from ammonium sulphate gradient loaded liposomes.