デングウイルスNS4Aの細胞質ドメインの変異は、ウイルスの体力や他の非構造タンパク質との相互作用に影響を与える

Mutations in the cytoplasmic domain of dengue virus NS4A affect virus fitness and interactions with other non-structural proteins.

• Min Jie Alvin Tan
• Nancy G Brown
• Kitti Wing Ki Chan
• Jocelyn Y Jin
• Sean Yao Zu Kong
• Subhash G Vasudevan

抄録

デングウイルス（DENV）複製複合体は、その非構造タンパク質（NS）とまだ同定されていない宿主タンパク質から構成されているが、これらのタンパク質間の分子間相互作用は十分に解明されていない。本研究では、DENV NS1 のドメイン II が NS4A の N 末端細胞質フラグメントに結合していることを明らかにし、NS1 とその仲間の NS 蛋白質の相互作用を酵母の二元架橋（Y2H）法を用いて明らかにした。NS4Aのこの細胞質領域のアミノ酸残基41および43の変異は、NS1とNS4A-2K-4B前駆体タンパク質との間の相互作用を破壊した。NS4A Y41F変異をDENV2感染性クローンを介してウイルスの文脈に導入したところ、この変異ウイルスはウイルスの体力が低下し、感染性ウイルスの産生が減少した。NS4A Y41F変異体ウイルスは、野生型ウイルスと比較してインターフェロン刺激遺伝子の転写活性化を有意に変異させたが、これはNS4AのI型インターフェロンシグナルを拮抗する能力とは無関係であった。以上のことから、DENV NS1とNS4Aの細胞質ドメインとの間には、その細胞機能およびウイルス機能に重要な関連があることが明らかになった。

The dengue virus (DENV) replication complex is made up of its non-structural (NS) proteins and yet-to-be identified host proteins, but the molecular interactions between these proteins are not fully elucidated. In this work, we sought to uncover the interactions between DENV NS1 and its fellow NS proteins using a yeast two-hybrid (Y2H) approach, and found that domain II of NS1 binds to an N-terminal cytoplasmic fragment of NS4A. Mutations in amino acid residues 41 and 43 in this cytoplasmic region of NS4A disrupted the interaction between NS1 and the NS4A-2K-4B precursor protein. When the NS4A Y41F mutation was introduced into the context of the virus via a DENV2 infectious clone, this mutant virus exhibited impaired viral fitness and decreased infectious virus production. The NS4A Y41F mutant virus triggered a significantly muted transcriptional activation of interferon-stimulated genes compared to wild-type virus that is independent of NS4A's ability to antagonize type I interferon signalling. Taken together, we have identified a link between DENV NS1 and the cytoplasmic domain in NS4A that is important for its cellular and viral functions.