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ヒト骨格筋の毛細血管、3種類の筋線維、基底ラミナを同時に同定するための2つの新しい信頼性の高い免疫組織化学的手法を開発した
Two new reliable immunohistochemical methods for simultaneous identification of capillaries, the three types of fibers and basal lamina in human skeletal muscle.
PMID: 32591977 DOI: 10.1007/s00418-020-01895-5.
抄録
骨格筋の毛細血管ネットワークは酸素供給に重要な役割を果たしており、筋繊維の表現型や代謝プロファイルに強く関連している。豊富な文献は、異なる集団で、異なる介入に応答して、骨格筋の毛細血管化を調査してきました。毛細血管と繊維タイプの同定技術は過去数十年の間にかなり進化してきましたが、我々の知る限りでは、（CD31を使用して）毛細血管、3つの異なる筋繊維タイプ、および基底ラミナを同時に同定するための有効な免疫組織化学的方法はまだ開発されていませんでした。毛細血管の識別のための異なるCD31抗体の信頼性、単一切片法と直列切片法の間の信頼性、および毛細血管の視覚的検出における実験室内の再現性をテストするために、9つのヒト側広筋生検を5つの異なる方法を使用して染色されました。毛細血管に対する異なる抗体の高い信頼性は、毛細血管接触（CC）測定（クラス内相関（ICC）[ICC]は、I型繊維で0.89 [0.72; 0.96]、IIA型繊維で0.93 [0.81; 0.97]、IIX型繊維で0.88 [0.71; 0.96]、全繊維タイプで0.95 [0.86; 0.98]）において観察され、また、単切除法と直列切除法の間で高いレベルの類似性が認められました。各サンプル測定において、異なる方法間のキャピラリー分析において強い類似性が得られた。Linの同心相関係数とBlandとAltmanのグラフィックスの分析は、強い実験室内再現性を示した。本論文は、単一の筋切片上の筋毛細血管化とともに完全な繊維タイピング（タイプI、IIA、およびIIX）を正確に評価するための2つの時間と組織を惜しまない免疫組織化学的方法を提案する。
Capillary network of skeletal muscle has a crucial role in oxygen supply and is strongly associated with the phenotype and metabolic profile of muscle fibers. Abundant literature has explored capillarization of skeletal muscle in different populations and in response to different interventions. Capillary and fiber type identification techniques have considerably evolved over the last decades, but to the best of our knowledge, no validated immunohistochemical method has yet been developed to simultaneously identify capillaries (using CD31), the three different muscle fiber types, and basal lamina. Nine human muscle biopsies of vastus lateralis were stained using 5 different methods to test: the reliability of different CD31 antibodies for capillary identification, the reliability between single-section or serial-section methods, and the intra-experimenter reproducibility in visual detection of capillaries. High reliability for the different antibodies directed against capillaries was observed for capillary contacts (CC) measurements (intra-class correlations (ICC) [ICC] of 0.89 [0.72; 0.96] for type I fibers, 0.93 [0.81; 0.97] for type IIA fibers, 0.88 [0.71; 0.96] for type IIX fibers, 0.95 [0.86; 0.98] for all fiber types) as well as a high level of similarity between single and serial sections methods. A strong similarity in capillary analysis between the different methods was obtained for each sample measurements. Analysis of Lin's concordance correlation coefficients and Bland and Altman's graphics showed a strong intra-experimenter reproducibility. This article proposes two time- and tissue-sparing immunohistochemical methods to accurately assess a complete fiber typing (type I, IIA, and IIX) along with muscle capillarization on a single muscle section.