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アミロイドベータ処理した神経細胞におけるZL006の神経保護効果
Neuroprotective effects of ZL006 in Aβ-treated neuronal cells.
PMID: 32594052 DOI: 10.4103/1673-5374.285006.
抄録
アミロイドβ（Aβ）による神経毒性と酸化ストレスは、アルツハイマー病の発症に重要な役割を果たしています。ZL006は、神経細胞の一酸化窒素合成酵素とシナプス後密度タンパク質95の相互作用を阻害することで、虚血性脳卒中における過剰生成一酸化窒素と酸化ストレスを低減することが示されています。しかし、ADにおけるZL006の役割についての研究はほとんど報告されていない。我々は、ZL006がADにおける神経保護効果を発揮するかどうかを調べるために、ADのin vitroモデルとしてAβを用いて初代皮質ニューロンとN2a神経芽腫細胞を治療した。皮質ニューロンをZL006またはジメチルスルホキシドで2時間インキュベートし、さらにAβまたはNH-HOで24時間処理した。細胞計数キット-8（CCK-8）アッセイおよびカルセイン-アセトキシメチルエステル/ヨウ化プロピジウム染色の結果、ZL006前処理はAβによって誘導された神経細胞死を救済することが示された。また、酸化ストレスとアポトーシス関連タンパク質の検出には、蛍光およびウェスタンブロットアッセイを用いた。その結果、ZL006前処理はAβによって誘導される神経細胞のアポトーシスと酸化ストレスを減少させることが明らかになった。また、CCK8アッセイの結果、皮質神経細胞のAktやNF-E2関連因子2(Nrf2)を阻害することで、ZL006の保護効果は消失した。さらに、N2a神経芽腫細胞においても同様の結果が得られた。ZL006はAβによって誘導されるN2a細胞の死滅と酸化ストレスを抑制したが、AktやNrf2の阻害はZL006の保護効果を消失させた。以上の結果から、ZL006はAβにより誘発される神経細胞の損傷や酸化ストレスを抑制し、そのメカニズムはAkt/Nrf2/ヘムオキシゲナーゼ-1シグナル伝達経路の活性化と関連している可能性が示唆されました。
Amyloid beta (Aβ)-induced neurotoxicity and oxidative stress plays an important role in the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). ZL006 is shown to reduce over-produced nitric oxide and oxidative stress in ischemic stroke by interrupting the interaction of neuronal nitric oxide synthase and postsynaptic density protein 95. However, few studies are reported on the role of ZL006 in AD. To investigate whether ZL006 exerted neuroprotective effects in AD, we used Aβ to treat primary cortical neurons and N2a neuroblastoma cells as an in vitro model of AD. Cortical neurons were incubated with ZL006 or dimethyl sulfoxide for 2 hours and treated with Aβ or NH•HO for another 24 hours. The results of cell counting Kit-8 (CCK-8) assay and calcein-acetoxymethylester/propidium iodide staining showed that ZL006 pretreatment rescued the neuronal death induced by Aβ. Fluorescence and western blot assay were used to detect oxidative stress and apoptosis-related proteins in each group of cells. Results showed that ZL006 pretreatment decreased neuronal apoptosis and oxidative stress induced by Aβ. The results of CCK8 assay showed that inhibition of Akt or NF-E2-related factor 2 (Nrf2) in cortical neurons abolished the protective effects of ZL006. Moreover, similar results were also observed in N2a neuroblastoma cells. ZL006 inhibited N2a cell death and oxidative stress induced by Aβ, while inhibition of Akt or Nrf2 abolished the protective effect of ZL006. These results demonstrated that ZL006 reduced Aβ-induced neuronal damage and oxidative stress, and the mechanisms might be associated with the activation of Akt/Nrf2/heme oxygenase-1 signaling pathways.