イントロン挿入によるアヒル・テンブスウイルスの完全長感染性cDNAクローンの安定化

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J. Virol. Methods.2020 Sep;283:113922. S0166-0934(20)30174-9. doi: 10.1016/j.jviromet.2020.113922.Epub 2020-06-26.

イントロン挿入によるアヒル・テンブスウイルスの完全長感染性cDNAクローンの安定化

Stabilization of a full-length infectious cDNA clone for duck Tembusu virus by insertion of an intron.

Jiaqi Guo
Yu He
Xiaoli Wang
Bowen Jiang
Xiao Lin
Mingshu Wang
Renyong Jia
Dekang Zhu
Mafeng Liu
Xinxin Zhao
Qiao Yang
Ying Wu
Shun Chen
Anchun Cheng

PMID: 32598895 DOI: 10.1016/j.jviromet.2020.113922.

抄録

アヒル天狗ウイルス（DTMUV）は、フラビウイルス科フラビウイルス属に属するウイルスである。これまでの研究で、DTMUVの完全長cDNAクローンが構築されたが、フラビウイルスに共通する原核生物の毒性のため、遺伝子操作時に突然変異を起こしやすいという問題があった。本研究では、臨床株CQW1のイントロ（133bp）がDTMUVの非構造タンパク質1に192部位で挿入されたイントロン含有完全長cDNAクローンを報告した。このイントロン含有完全長cDNAクローンは、原核生物毒性を持たずに大腸菌で安定に増殖し、プラスミドを直接トランスフェクションすることで組換えウイルスを作製した。また、このcDNAクローン由来の組換えウイルスは、in vitroおよびin vivoの両方で親ウイルスと比較して同様の性質を示した。このように、本研究では、ウイルスの逆遺伝学的研究のためのプラットフォームとしての利用が可能であることを示した。

Duck Tembusu virus (DTMUV) belongs to the genus Flavivirus, family Flaviviridae. In our previously study, a full-length cDNA clone of DTMUV was constructed, however, it is prone to mutation during genetic engineering due to the prokaryotic toxicity of viral protein, which is also a common feature for flavivirus. In this study, we reported an intron-containing full-length cDNA clone for a clinical strain CQW1, the intro (133bp) was inserted into nonstructural protein 1 of DTMUV at 192 site. This intron-containing full-length cDNA clone was stably propagated in Escherichia coli without prokaryotic toxicity, and recombinant virus was produced by direct transfection of plasmids. Besides, this cDNA clone-derived recombinant virus showed similar properties in comparison with parent virus both in vitro and in vivo. It's convenient and efficient, making it a useful platform for the subsequent research of reverse genetics of flavivirus.