ラット血漿中のトルコ胆汁からのガロン酸、胆汁酸メチル、1,3,6-トリオ-O-ガロイル-β-d-グルコースの液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法による同時定量と薬物動態研究への応用

Simultaneous determination of gallic acid, methyl gallate, and 1,3,6-tri-O-galloyl-β-d-glucose from Turkish galls in rat plasma using liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to pharmacokinetics study.

• Jing Gong
• Lin Li
• Yi-Xuan Lin
• Dan Xiao
• Wen Liu
• Bao-Rong Zou
• Xing Tian
• Bo Han
• Shao-Bao Zhang
• Lei Lin
• Pei Li
• Zhi-Yong Xie
• Qiong-Feng Liao

抄録

トルコガルス（TG）はウイグルの伝統的な薬であり、歯科疾患や慢性潰瘍性大腸炎の診療所で一般的に使用されている。本研究では、TGの主要な生理活性化合物であるラット血漿中のガロン酸、ガレート酸メチル、1,3,6-トリ-O-ガロイル-β-d-グルコースの同時定量のための新しい液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法を開発し、有効性を検証した。試料調製にアセトニトリルを用いて実行可能なタンパク質沈殿を行った後、BDS Hypersil C18カラム(2.1×100mm, 5μm)を用いて30℃でクロマトグラフィー分離を行い、移動相に酢酸アンモニウム10mmolとアセトニトリルを含む水を0.3mL/minの流量で用いた。MS検出器は、負イオン化モードによる選択的反応モニタリングで操作した。メソッドバリデーションの結果、選択性、直線性、精度、精度、抽出回収率、マトリックス効果、およびバイオサンプル中の化合物の安定性は、すべて現行の受け入れ基準の範囲内であった。確立された方法は、TG抽出物の経口投与後のラットにおける3つの分析物の薬物動態試験に適用することに成功し、TGの有効成分やin vivoでのメカニズムを研究するための基礎を築くことができました。

Turkish galls (TG) is a traditional Uygur medicine typically used in clinics for dental disease and chronic ulcerative colitis. In this study, a novel liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was developed and validated for the simultaneous quantification of gallic acid, methyl gallate, and 1,3,6-tri-O-galloyl-β-d-glucose in rat plasma, which are the major bioactive compounds of TG. After a feasible protein precipitation using acetonitrile for sample preparation, chromatographic separation was performed with a BDS Hypersil C18 column (2.1 × 100 mm, 5 μm) at 30°C, and water containing 10 mmol of ammonium acetate and acetonitrile was used as the mobile phase with a flow rate of 0.3 mL/min. The MS detector was operated in the selective reaction monitoring with negative-ionization mode. The results of the method validation, including selectivity, linearity, accuracy, precision, extraction recovery, matrix effect, and stability of the compounds in the biosamples, were all within the current acceptance criteria. The established method was successfully applied to the pharmacokinetics study of three analytes in rats after an oral administration of TG extract and laid the foundation for studying the active components and mechanism of TG in vivo.

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