LINC01224はmicroRNA-485-5pを介したPAK4アップレギュレーションを介して上皮性卵巣癌において癌促進活性を示す

LINC01224 Exhibits Cancer-Promoting Activity in Epithelial Ovarian Cancer Through microRNA-485-5p-Mediated PAK4 Upregulation.

• Shujian Xing
• Yaqi Zhang
• Jing Zhang

抄録

目的:

長鎖遺伝子間非蛋白質コードRNA1224（LINC01224）は、肝細胞癌の腫瘍形成と進行に重要な役割を果たしている。ここでは、上皮性卵巣癌（EOC）の組織および細胞におけるLINC01224の発現を決定した。また、EOC細胞の悪性表現型に対するLINC01224ノックダウンの効果をin vitroおよびin vivoで評価した。さらに、EOC細胞におけるLINC01224の発がん作用の基礎となる詳細な分子機構を明らかにしました。

Purpose: Long intergenic non-protein coding RNA 1224 (LINC01224) plays vital roles in the tumorigenesis and progression of hepatocellular carcinoma. Here, we determined LINC01224 expression in epithelial ovarian cancer (EOC) tissues and cells. We also assessed the effects of LINC01224 knockdown on the malignant phenotype of EOC cells both in vitro and in vivo. Furthermore, the detailed molecular mechanisms underlying the oncogenic actions of LINC01224 in EOC cells were elucidated.

方法:

定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）を用いて、EOCの組織および細胞におけるLINC01224の発現を検出した。EOC細胞をsmall interfering RNAでトランスフェクトし、細胞増殖、アポトーシス、遊走および浸潤を、Cell Counting Kit-8アッセイ、フローサイトメトリー、細胞遊走アッセイおよび細胞浸潤アッセイを用いて、それぞれ評価した。腫瘍異種移植片を用いて、EOC腫瘍の増殖に対するLINC01224サイレンシングの効果をin vivoで解析した。バイオインフォマティクス、RNA免疫沈降アッセイ、qRT-PCR、ウェスタンブロッティング、レスキュー実験を用いて、EOC細胞におけるLINC01224の悪性プロセスの制御機構を検討した。

Methods: Quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to detect LINC01224 expression in EOC tissues and cells. EOC cells were transfected with small interfering RNAs, and cell proliferation, apoptosis, migration, and invasion were assessed using Cell Counting Kit-8 assay, flow cytometry, cell migration assays, and cell invasion assays, respectively. Using tumor xenografts, the effects of LINC01224 silencing on EOC tumor growth were analyzed in vivo. The mechanism underlying LINC01224 regulation of malignant processes in EOC cells was explored using bioinformatics, RNA immunoprecipitation assay, qRT-PCR, Western blotting, and rescue experiments.

研究成果:

LINC01224の発現はEOCの組織と細胞でアップレギュレーションされた。LINC01224発現のアップレギュレーションは、腫瘍の大きさ、国際産科婦人科連合病期、リンパ節転移と相関していた。EOC細胞におけるLINC01224の枯渇は細胞増殖、遊走、浸潤を抑制し、in vitroでは細胞のアポトーシスを促進した。また、LINC01224のダウンレギュレーションは、生体内でのEOC腫瘍の増殖を抑制した。また、LINC01224はmicroRNA-485-5p（miR-485-5p）と競合する内因性RNAとして機能し、その結果、EOC細胞ではp21-activated kinase 4（PAK4）の発現が増加した。さらに、miR-485-5pの阻害またはPAK4のアップレギュレーションは、EOC細胞におけるLINC01224枯渇の効果を有意に阻害した。

Results: LINC01224 expression was upregulated in EOC tissues and cells. LINC01224 upregulation was correlated to tumor size, the International Federation of Gynecology and Obstetrics stage, and lymph node metastasis. LINC01224 depletion in EOC cells suppressed cell proliferation, migration, and invasion and facilitated cell apoptosis in vitro. LINC01224 downregulation also hindered EOC tumor growth in vivo. Mechanistically, LINC01224 served as a competing endogenous RNA for microRNA-485-5p (miR-485-5p) and consequently increased p21-activated kinase 4 (PAK4) expression in EOC cells. Furthermore, miR-485-5p inhibition or PAK4 upregulation significantly abrogated the effects of LINC01224 depletion in EOC cells.

結論:

LINC01224/miR-485-5p/PAK4は、競合する内因性RNAネットワークを形成し、EOCの攻撃的な行動を制御していた。したがって、この経路を標的とすることは、EOCの治療戦略として魅力的であると考えられる。

Conclusion: LINC01224/miR-485-5p/PAK4 formed a competing endogenous RNA network regulating the aggressive behavior of EOC. Therefore, targeting this pathway may be an attractive therapeutic strategy for EOC.

© 2020 Xing et al.