Skp2 の阻害は慢性骨髄性白血病細胞をイマチニブに感作する

Inhibition of Skp2 Sensitizes Chronic Myeloid Leukemia Cells to Imatinib.

• Xiaowen Chen
• Zhenqi Huang
• Wei Wu
• Ruixiang Xia

抄録

序文:

Skp2 は E3 ユビキチンリガーゼであり、腫瘍の進行を調節する上で重要な役割を果たしている。Skp2 の増殖促進機構や、ヒト CML におけるチロシンキナーゼ阻害剤（TKI）に対する一次抵抗性における機能については、未だ解明されていない。本研究では、CML の進行における Skp2 の機能と TKI に対する感受性への影響を調べることを目的とした。

Introduction: Skp2 is an E3 ubiquitin ligase that plays an important role in modulating tumor progression. The mechanisms underlying Skp2 in the promotion of proliferation and its function in the primary resistance to tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in human CML remain to be determined. This study aimed to investigate the function of Skp2 in CML progression as well as its effects on TKI sensitivity.

方法:

CML 患者および正常血液サンプルの白血球における Skp2 の発現を qRT-PCR により解析した。細胞増殖は、EdU取り込みおよび細胞数測定法を用いて解析した。ルシフェラーゼレポーターおよびクロマチン免疫沈降アッセイを用いて、Skp2発現に対するCREBの効果を検討した。K562細胞のインビトロでのアポトーシスをMTTおよびカスパーゼ3/7活性アッセイにより解析した。

Methods: Expression of Skp2 in leukocytes from patients with CML and normal blood samples was analyzed by qRT-PCR. Cell proliferation was analyzed by EdU incorporation and cell counting assays. Luciferase reporter and chromatin immunoprecipitation assays were used for examination of the effects of CREB on Skp2 expression. The apoptosis in vitro of K562 cells was analyzed by MTT and caspase 3/7 activity assays.

研究成果:

本研究の結果、CML 患者では Skp2 が健康なドナーと比較して高いレベルで発現しており、Skp2 の発現亢進が CML 細胞の増殖に重要であることが明らかになった。メカニズム的には、Skp2はPI3K/Aktシグナル伝達経路に応答してCREBによって転写アップレギュレーションされていました。さらに、Skp2 の発現を shRNA で阻害したり、PI3K/Akt/CREB を阻害することで、CML 細胞のイマチニブ治療に対する感受性が大幅に向上することが示された。

Results: The present study demonstrates that Skp2 was expressed at a higher level in patients with CML compared with healthy donors, and the elevated expression of Skp2 is critical for CML cell proliferation. Mechanistically, Skp2 was transcriptionally upregulated by CREB responsive to the PI3K/Akt signaling pathway. Furthermore, inhibition of Skp2 expression by shRNAs or blocking the PI3K/Akt/CREB pathway greatly enhances the sensitivity of CML cells to Imatinib treatment.

結論:

我々は、PI3K/Akt/CREB 軸が Skp2 発現を介して K562 細胞のイマチニブに対する感受性を制御していると結論づけた。本研究は、CML の進行における Skp2 の知られざる役割を明らかにし、CML における Skp2 が制御する TKI の感受性について新たな側面を提供するものであり、抗がん剤治療の可能性のある薬剤の開発に貢献するものである。

Conclusion: We conclude that the PI3K/Akt/CREB axis regulates the sensitivity of K562 cells to Imatinib via mediating Skp2 expression. The present study revealed an unknown role of Skp2 in CML progression and provided new aspects on the Skp2-modulated TKI sensitivity in CML, contributing to the development of potential therapeutic anticancer drugs.

© 2020 Chen et al.