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ネイティブ イオン交換質量分析法を用いた、AJICAP 第一世代技術により生成された部位特異的な抗体-薬物コンジュゲートのインタクト分析およびサブユニット分析への応用
Application of Native Ion Exchange Mass Spectrometry to Intact and Subunit Analysis of Site-Specific Antibody-Drug Conjugates Produced by AJICAP First Generation Technology.
PMID: 32608232 DOI: 10.1021/jasms.0c00129.
抄録
抗体医薬コンジュゲート（ADC）は、次世代のがんバイオ医薬品の最前線に位置しています。従来のADCは、抗体と細胞障害性薬物との確率的な結合により、非常に不均一な製品を作り出していました。その結果として生じる確率的な分布は、治療指標が狭くなることが多く、不均一なADCの組成を解析することが困難になります。このような問題を解決するために、私たちは、不均一性の低い ADC を製造するための部位特異的結合技術 AJICAP を開発しました。本研究では、これらの部位特異的ADCの分析のために、強陽イオン交換クロマトグラフィーと紫外・質量分析法（SCX-UV-MS）を組み合わせた分析法を開発したことを報告する。SCXカラムの平衡化後の保持時間の再現性により、製品の品質の重要な変化をモニタリングすることができました。MS互換性のある移動相を用いたSCX-UV-MSは、インタクトなネイティブADC分析のために実施され、1回の分析で薬物-抗体比の特性評価と電荷バリアントの特性評価を可能にしました。さらに、ネイティブSCX-UV-MSによる部位特異的ADCのサブユニット解析により、AJICAPコンジュゲーションにより生成されたADCのFc部位選択性が確認された。
Antibody-drug conjugates (ADCs) are at the forefront of the next generation of oncology biopharmaceuticals. Conventional ADCs involve stochastic conjugation of the antibody to a cytotoxic drug, creating a highly heterogeneous product. The resulting stochastic distribution often leads to a narrow therapeutic index and makes it difficult to analyze the composition of heterogeneous ADCs. With the goal of overcoming these issues, we developed a site-specific conjugation technology, named AJICAP, for production of low heterogeneity ADCs. For analysis of these site-specific ADCs, we report herein strong cation exchange chromatography coupled with UV and mass spectrometry detection (SCX-UV-MS). Retention time reproducibility after SCX column equilibration enabled monitoring of important changes in product quality. SCX-UV-MS performed with MS-compatible mobile phases was conducted for intact native ADC analysis, allowing drug-antibody ratio characterization and charge variant characterization in single analysis. Furthermore, subunit analysis of the site-specific ADCs by native SCX-UV-MS confirmed the Fc site selectivity of ADCs generated by AJICAP conjugation.