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キラルクラウンエーテル固定相上の液体クロマトグラフィー/質量分析法を用いたアミノ酸の高速エナンチオマー分離の研究
Fast enantiomeric separation of amino acids using liquid chromatography/mass spectrometry on a chiral crown ether stationary phase.
PMID: 32616382 DOI: 10.1016/j.jbiosc.2020.05.007.
抄録
キラルクラウンエーテル固定相上での液体クロマトグラフィー/質量分析(LC/MS)を用いて、アミノ酸の高速エナンチオマー分離を調べた。キラルクラウンエーテル結合シリカカラム（内径3mm、長さ5cm）に3μmの粒子を充填したカラムを採用した。さらに、内径0.127mmのポストカラムチューブを、内径0.0635mmの短い小径チューブに置き換えることで、カラム外ばらつきが小さくなった。この結果は、より小さな粒子で充填された短いカラムを使用することの利点と、高速エナンチオマー分離のためのカラム外バンド幅の減少を実証した。最後に、アセトニトリル/水/トリフルオロ酢酸(ACN/W/TFA)=96/4/0.5のアイソクラティック移動相を用いて、30℃で流速1.2mL/minを用いて、18組のタンパク質原性アミノ酸のエナンチオマー分離を、各組について分解能(Rs)>1.5で2分以内に達成しました。これは、プロリンを除く全ての蛋白質原性アミノ酸の同時キラル分離において、これまでで最も高い処理能力を有しています。
Fast enantiomeric separation of amino acids was studied by liquid chromatography/mass spectrometry (LC/MS) on a chiral crown ether stationary phase. A chiral crown ether bonded silica column (3 mm internal diameter (i.d.), 5 cm long) packed with 3 μm particles was employed instead of a 15 cm column packed with 5 μm particles used in our previous study. In addition, the extra-column variance, becoming more serious for smaller columns, was reduced by replacing 0.127 mm i.d. post-column tubes with shorter, smaller-diameter (0.0635 mm i.d.) tubes. The results demonstrated the benefits of using shorter columns packed with smaller particles and the reduction of the extra-column band broadening for fast enantiomeric separation. Finally, the enantiomeric separation of 18 pairs of proteinogenic amino acids was achieved within 2 min with a resolution (Rs) > 1.5 for each pair using an isocratic mobile phase of acetonitrile/water/trifluoroacetic acid (ACN/W/TFA) = 96/4/0.5, and a flow rate 1.2 mL/min at 30°C. This is the highest throughput method for simultaneous chiral separation of all proteinogenic amino acids except proline to date.
Copyright © 2020 The Society for Biotechnology, Japan. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.