ダンルー錠（）は、HIF-1 α-Angptl4 mRNAシグナル伝達経路により、慢性間欠性低酸素誘導性脂質異常症および動脈硬化を改善する

Danlou Tablet () Improves Chronic Intermittent Hypoxia-induced Dyslipidemia and Arteriosclerosis by HIF-1 α-Angptl4 mRNA Signaling Pathway.

• Jing-Jing Tang
• Guang-Xi Li
• Zhi-Guo Liu
• Rong Yi
• Dong Yu
• Yue-Bo Zhang
• Shuang-Qiao Zhao
• Shi-Han Wang

抄録

目的:

ダンルー錠（DLT）が低酸素誘導因子（HIF）-1 α-アンジオポエチン様4（Angptl4）mRNAシグナル伝達経路を制御しているかどうかを検出し、慢性間欠性低酸素症（CIH）誘発性脂質異常症及び動脈硬化症の治療におけるDLTの役割を探ることを目的とした。

OBJECTIVE: To detect whether Danlou Tablet (, DLT) regulates the hypoxia-induced factor (HIF)-1 α-angiopoietin-like 4 (Angptl4) mRNA signaling pathway and explore the role of DLT in treating chronic intermittent hypoxia (CIH)-induced dyslipidemia and arteriosclerosis.

方法:

3T3-L1細胞培養から成熟脂肪細胞を得て、コントロールグループ（グループ1および5、細胞培養グレードの水0.1 mL）；DLTグループ（グループ2および6、1,000 µg/mL DLTサブミクロン粉末溶液0.1 mL）；ジメチルオキサリルグリシン（DMOG）グループ（グループ3および7、DMOGおよび0.1 mL）を含む8つのグループに割り付けた。1,000μg/mLのDLTサブミクロン粉末溶液0.1 mL）、ジメチルオキサリルグリシン（DMOG）グループ（グループ3および7、DMOGおよび細胞培養グレードの水0.1 mL）、DMOGプラスDLTグループ（グループ4および8、DMOGおよび1,000μg/mLのDLTサブミクロン粉末溶液0.1 mL）を含む8つのグループに割り付けた。グループ１〜４は成熟脂肪細胞を使用し、グループ５〜８はHIF-1 α-siRNAレンチウイルスをトランスフェクトした成熟脂肪細胞を使用した。24時間処理後、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応およびウェスタンブロットを用いて、HIF-1 αおよびAngptl4のmRNAおよびタンパク質発現レベルを決定した。動物実験では、ApoEマウスにおけるCIHモデルを確立した。16匹のマウスを、シャム群、CIHモデル群（間欠的低酸素と通常の生理食塩水（2mL/回）を1日1回経口投与）、Angptl4 Ab群（間欠的低酸素とAngptl4抗体（30mg/kg）を1週間に1回腹腔内注射）、DLT群（間欠的低酸素とDLT（250mg/kg）を1日1回投与）の4群に完全無作為に分け、各群4匹のマウスに投与した。4週間投与後、血清総コレステロール（TC）およびトリグリセリド（TG）の発現量を酵素連結免疫吸着アッセイで検出した。動脈プラークの形態学的性質を観察するためにヘマトキシリンエオシン染色およびCD68染色を用いた。

METHODS: The mature adipocytes were obtained from 3T3-L1 cell culturation and allocated into 8 groups including control groups (Groups 1 and 5, 0.1 mL of cell culture grade water); DLT groups (Groups 2 and 6, 0.1 mL of 1,000 µg/mL DLT submicron powder solution); dimethyloxalylglycine (DMOG) groups (Groups 3 and 7, DMOG and 0.1 mL of cell culture grade water); DMOG plus DLT groups (Groups 4 and 8, DMOG and 0.1 mL of 1,000 µg/mL DLT submicron powder solution). Groups 1-4 used mature adipocytes and groups 5-8 used HIF-1 α-siRNA lentivirus-transfected mature adipocytes. After 24-h treatment, real-time polymerase chain reaction and Western blot were employed to determine the mRNA and protein expression levels of HIF-1 α and Angptl4. In animal experiments, the CIH model in ApoE mice was established. Sixteen mice were complete randomly divided into 4 groups including sham group, CIH model group [intermittent hypoxia and normal saline (2 mL/time) gavage once a day]; Angptl4 Ab group [intermittent hypoxia and Angptl4 antibody (30 mg/kg) intraperitoneally injected every week]; DLT group [intermittent hypoxia and DLT (250 mg/kg) once a day], 4 mice in each group. After 4-week treatment, enzyme linked immunosorbent assay was used to detect the expression levels of serum total cholesterol (TC) and triglyceride (TG). Hematoxylin-eosin and CD68 staining were used to observe the morphological properties of arterial plaques.

結果:

Angptl4発現はHIF-1 αに依存しており、siHIF-1 αをトランスフェクトした細胞と比較して、mRNA発現の低下とDMOGまたはDLT処理に対するタンパク質レベルの応答は認められなかった。DLTは、成熟脂肪細胞において、HIF-1 αタンパク質に対する効果がsiHIF-1 αの存在下でも存在するように、HIF-1 αおよびAngptl4 mRNA発現を阻害し（P<0.05またはP<0.01）、DMOGとともにHIF-1 αおよびAngptl4タンパク質発現を減少させた（すべてP<0.01）。CIHで処理したApoEマウスは、TGおよびTCレベルの増加（すべてP<0.01）および動脈硬化性プラークを有していた。Angptl4抗体とDLTはともにTGとTCレベルを低下させ（すべてP<0.01）、動脈硬化性プラークの面積を減少させ、動脈壁厚を狭め、動脈硬化性病変の症状をある程度緩和させた。

RESULTS: Angptl4 expression was dependent on HIF-1 α, with a reduction in mRNA expression and no response in protein level to DMOG or DLT treatment in relation to siHIF-1 α -transfected cells. DLT inhibited HIF-1 α and Angptl4 mRNA expression (P<0.05 or P<0.01) and reduced HIF-1 α and Angptl4 protein expressions with DMOG in mature adipocytes (all P<0.01), as the effect on HIF-1 α protein also existed in the presence of siHIF-1 α (P<0.01). ApoE mice treated with CIH had increased TG and TC levels (all P<0.01) and atherosclerotic plaque. Angptl4 antibody and DLT both reduce TG and TC levels (all P<0.01), as well as reducing atherosclerotic plaque areas, narrowing arterial wall thickness and alleviating atherosclerotic lesion symptoms to some extent.

結論:

DLTは、HIF-1 α-Angptl4 mRNAシグナル伝達経路を介してAngptl4タンパク質レベルを抑制することで、脂質異常症および動脈硬化の改善効果を示した。

CONCLUSION: DLT had positive effects in improving dyslipidemia and arteriosclerosis by inhibiting Angptl4 protein level through HIF-1 α-Angptl4 mRNA signaling pathway.