照射された末梢血単核細胞によって分泌される脂質のin vitroでの炎症性解決における役割

Role for Lipids Secreted by Irradiated Peripheral Blood Mononuclear Cells in Inflammatory Resolution in Vitro.

• Layla Panahipour
• Evgeniya Kochergina
• Maria Laggner
• Matthias Zimmermann
• Michael Mildner
• Hendrik J Ankersmit
• Reinhard Gruber

抄録

歯周炎は死滅しつつある細胞と関連しており、その細胞は潜在的に代謝物を放出して炎症の解決を促進している。私たちは以前、照射された瀕死の末梢血単核細胞のシークレットームがin vitroでの血管新生をサポートすることを示していました。しかし、このシークレットームが炎症性解離を促進する能力については不明な点が多い。ここでは、γ線照射した末梢血単核球から得られたシークレットームに曝露したマウス骨髄マクロファージ、RAW264.7細胞、歯肉線維芽細胞における炎症性サイトカインの発現変化をRT-PCRおよびイムノアッセイにより決定した。p65の核内転座は免疫蛍光染色により検出された。また、p65 のリン酸化と IκB の分解をウェスタンブロットで測定した。照射した末梢血単核球のシークレットームは、LPSまたは唾液に曝露した場合、一次マクロファージおよびRAW264.7細胞におけるIL1およびIL6の発現を有意に減少させ、IL-1βおよびTNFαに曝露した場合、歯肉線維芽細胞におけるIL1、IL6およびIL8の発現を有意に減少させた。これらの変化は、マクロファージにおけるIκBの分解ではなく、p65のリン酸化と核内転座の減少と関連していた。また、シークレットームの脂質画分が、炎症性キューに曝露されたマクロファージの炎症性反応を低下させることも示した。これらの結果は、照射された末梢血単核球の分泌物がin vitroでシミュレートされた炎症反応を低下させることを示しており、死にかけている細胞の分泌物が炎症の解決を促進するという全体的な概念を支持するものである。

Periodontal inflammation is associated with dying cells that potentially release metabolites helping to promote inflammatory resolution. We had shown earlier that the secretome of irradiated, dying peripheral blood mononuclear cells support in vitro angiogenesis. However, the ability of the secretome to promote inflammatory resolution remains unknown. Here, we determined the expression changes of inflammatory cytokines in murine bone marrow macrophages, RAW264.7 cells, and gingival fibroblasts exposed to the secretome obtained from γ-irradiated peripheral blood mononuclear cells in vitro by RT-PCR and immunoassays. Nuclear translocation of p65 was detected by immunofluorescence staining. Phosphorylation of p65 and degradation of IκB was determined by Western blot. The secretome of irradiated peripheral blood mononuclear cells significantly decreased the expression of IL1 and IL6 in primary macrophages and RAW264.7 cells when exposed to LPS or saliva, and of IL1, IL6, and IL8 in gingival fibroblasts when exposed to IL-1β and TNFα. These changes were associated with decreased phosphorylation and nuclear translocation of p65 but not degradation of IκB in macrophages. We also show that the lipid fraction of the secretome lowered the inflammatory response of macrophages exposed to the inflammatory cues. These results demonstrate that the secretome of irradiated peripheral blood mononuclear cells can lower an in vitro simulated inflammatory response, supporting the overall concept that the secretome of dying cells promotes inflammatory resolution.