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Ｂｍ８６タンパク質に結合したＰ０ペプチドに基づく抗ダニ抗原の機能および質量分析評価
Functional and Mass Spectrometric Evaluation of an Anti-Tick Antigen Based on the P0 Peptide Conjugated to Bm86 Protein.
PMID: 32630414 PMCID: PMC7350365. DOI: 10.3390/pathogens9060513.
抄録
マダニ由来のリボソームタンパク質P0の合成20アミノ酸ペプチドをキーホールリンペットヘモシアニンに結合させて免疫原として使用すると，約90％の有効性が示されています。また、この共役体のアンド種に対する高い有効性の実験的証拠があり、この抗原が良好な広域抗ダニワクチン候補となり得ることが示唆されている。本研究では、P0ペプチド（pP0）をキャリアタンパク質としてBm86に化学的に結合させた。このコンジュゲートのSDS-PAGE分析は、Bm86の1分子あたり1から18分子のpP0を運ぶ、非常に不均一なサイズであることを実証した。Bm86の54個のリジン残基とN末端のうち49個がpP0に部分的に結合していることが、LC-MS/MS分析と4つの異なるソフトウェアの組み合わせにより確認されました。また、Bm86タンパク質の翻訳後修飾も質量分析により確認された。犬と牛にpP0-Bm86コンジュゲートを接種し、それぞれs.l.およびs.l.でチャレンジしたところ、高い免疫原性と有効性が得られました。これらの結果は，ダニ対策ワクチンとしての可能性を秘めたこの抗原の開発を後押しするものである。
A synthetic 20 amino acid peptide of the ribosomal protein P0 from ticks, when conjugated to keyhole limpet hemocyanin from and used as an immunogen against and s.l. species, has shown efficacies of around 90%. There is also experimental evidence of a high efficacy of this conjugate against and species, which suggest that this antigen could be a good broad-spectrum anti-tick vaccine candidate. In this study, the P0 peptide (pP0) was chemically conjugated to Bm86 as a carrier protein. SDS-PAGE analysis of this conjugate demonstrated that it is highly heterogeneous in size, carrying from 1 to 18 molecules of pP0 per molecule of Bm86. Forty-nine out of the 54 lysine residues and the N-terminal end of Bm86 were found partially linked to pP0 by using LC-MS/MS analysis and the combination of four different softwares. Several post-translational modifications of Bm86 protein were also identified by mass spectrometry. High immunogenicity and efficacy were achieved when dogs and cattle were vaccinated with the pP0-Bm86 conjugate and challenged with s.l. and , respectively. These results encourage the development of this antigen with promising possibilities as an anti-tick vaccine.