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エンベロープとRNA依存性RNAポリメラーゼ（RdRp）のコード領域を標的とした世界保健機関（WHO）承認の2つのアッセイを組み合わせたSARS-CoV-2 RT-qPCRアッセイの開発と評価（英文
Development and Evaluation of a duo SARS-CoV-2 RT-qPCR Assay Combining Two Assays Approved by the World Health Organization Targeting the Envelope and the RNA-Dependant RNA Polymerase (RdRp) Coding Regions.
PMID: 32630601 DOI: 10.3390/v12060686.
抄録
近年、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス 2 (SARS-CoV-2) が世界的に出現したことにより、ウイルスの循環を予防および制御するための信頼性の高い迅速な診断検査の重要性が強調されています。すでに数十種類のモノプレックスRT-qPCRアッセイが市販されているが、診断検査やスクリーニング検査の精度を低下させる可能性のある多型や点突然変異による偽陰性結果を避けるためには、デュアルターゲットアッセイの開発が適している。本研究では、WHO が推奨する 2 つのモノターゲットアッセイ（E-Sarbeco（エンベロープ遺伝子、Charite University, Berlin, ドイツ）および RdRp-IP4（RdRp、Institut Pasteur, Paris, France）を選択し、独自の堅牢な試験に組み合わせた；得られたデュオ SARS-CoV-2 RT-qPCR アッセイを 2 つの親モノプレックス試験と比較した。デュオ SARS-CoV-2 アッセイは、感度、特異度、直線性、シグナル強度の点で同等かそれ以上の性能を示した。我々は、2 つの単一システムをデュアルターゲットアッセイ（MS2 ベースの内部コントロールの有無にかかわらず）に組み合わせても性能に影響を与えないことを実証し、臨床微生物検査室でのルーチンの分子診断に適した強力なツールを提供した。
The recent emergence of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) worldwide has highlighted the importance of reliable and rapid diagnostic testing to prevent and control virus circulation. Dozens of monoplex in-house RT-qPCR assays are already available; however, the development of dual-target assays is suited to avoid false-negative results caused by polymorphisms or point mutations, that can compromise the accuracy of diagnostic and screening tests. In this study, two mono-target assays recommended by WHO (E-Sarbeco (enveloppe gene, Charite University, Berlin, Germany) and RdRp-IP4 (RdRp, Institut Pasteur, Paris, France)) were selected and combined in a unique robust test; the resulting duo SARS-CoV-2 RT-qPCR assay was compared to the two parental monoplex tests. The duo SARS-CoV-2 assay performed equally, or better, in terms of sensitivity, specificity, linearity and signal intensity. We demonstrated that combining two single systems into a dual-target assay (with or without an MS2-based internal control) did not impair performances, providing a potent tool adapted for routine molecular diagnosis in clinical microbiology laboratories.