シロイヌナズナにおけるPI3Pの細胞内局在化

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Methods Mol. Biol..2020;2177:109-118. doi: 10.1007/978-1-0716-0767-1_10.

シロイヌナズナにおけるPI3Pの細胞内局在化

Subcellular Localization of PI3P in Arabidopsis.

Han Nim Lee
Hyera Jung
Taijoon Chung

PMID: 32632809 DOI: 10.1007/978-1-0716-0767-1_10.

抄録

ホスファチジルイノシトール-3-リン酸（PI3P）は、後期エンドソーム（LE）や液胞の膜に豊富に存在するシグナル伝達性のリン脂質です。PI3Pは、PI3P結合エフェクター蛋白質をLEにリクルートすることにより、液胞およびエンドソームの輸送を仲介しています。PI3Pは、VACUOLAR PROTEIN SORTING 34 (VPS34)を含むPI 3-キナーゼ複合体によってホスファチジルイノシトールから産生されます。PI3Pの役割は、遺伝的にコードされたPI3Pバイオセンサーを用いて解明されてきた。これまでに、シロイヌナズナのVPS38は、VPS34複合体の構成要素であるVPS38がLEに局在しており、VPS38がエンドソームおよび液胞輸送経路におけるPI3Pの適切な分布に不可欠であることを示してきた。本章では、PI3Pバイオセンサーであるシトリン-2×FYVEとPI3キナーゼ阻害剤を用いたPI3Pの顕微鏡イメージング方法について述べる。

Phosphatidylinositol-3-phosphate (PI3P) is a signaling phospholipid enriched in the membranes of late endosomes (LE) and vacuoles. PI3P mediates vacuolar and endosomal trafficking through recruiting PI3P-binding effector proteins to the LE. PI3P is produced from phosphatidylinositol by the PI 3-kinase complex containing VACUOLAR PROTEIN SORTING 34 (VPS34). The role of PI3P has been elucidated by using genetically encoded PI3P biosensors. We previously showed that Arabidopsis VPS38, a component of the VPS34 complex, localized at the LE and that VPS38 is essential for proper PI3P distribution in endosomal and vacuolar trafficking routes. In this chapter, we describe methods for microscopic imaging of PI3P using the PI3P biosensor citrine-2 × FYVE and the PI 3-kinase inhibitors.