METTL14は、M6Aメチル化修飾一次miR-19aを制御し、心血管内皮細胞の増殖と浸潤を促進する

METTL14 regulates M6A methylation-modified primary miR-19a to promote cardiovascular endothelial cell proliferation and invasion.

• B-Y Zhang
• L Han
• Y-F Tang
• G-X Zhang
• X-L Fan
• J-J Zhang
• Q Xue
• Z-Y Xu

抄録

目的:

増加する証拠は、N6-メチル-アデノシン(M6A)が様々な病態生理学的プロセスにおいて重要な役割を果たしていることを示していた。メチラーゼは、M6Aに依存した方法で成熟したmi-RNAの処理を促進し、それによって病理学的細胞の発生と発生に関与する可能性があった。しかし、アテローム性動脈硬化症（AS）におけるM6Aの制御機構はまだ明らかにされていませんでした。

OBJECTIVE: Increasing evidence indicated that N6-methyl-adenosine (M6A) played a key role in a variety of pathophysiological processes. Methylases could promote the processing of mature mi-RNA in a M6A-dependent manner, thereby participating in the pathological cells' occurrence and development. However, the regulatory mechanism of M6A in atherosclerosis (AS) was still unclear.

患者と方法:

定量化 リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）を用いて、アテローム性動脈硬化性血管内皮細胞（ASVEC）におけるM6A、メチルトランスフェラーゼ、デメチラーゼトランスフェラーゼ、miR-19aおよびその他のmi-RNAの相対的な発現量を検出した。細胞増殖の検出にはCell Counting Kit（CCK8）を用い、PCNAの発現はWestern Blot（WB）およびqRT-PCRにより測定した。トランスウェルアッセイを用いてASVECの浸潤能を検出した。ＭＥＴＴＬ１４とＤＧＣＲ８との結合を検出するために、共免疫沈降法（Ｃｏ-ＩＰ）を用いた。RNA免疫沈降法（RIP）は、METTL14とmiR-19aとの結合を検出するために使用された。

PATIENTS AND METHODS: Quantificational Real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to detect the relative expression levels of M6A, methyltransferase, demethylase transferase, miR-19a and other mi-RNA in atherosclerotic vascular endothelial cells (ASVEC). Cell Counting Kit (CCK8) was used to detect cell proliferation, the expression of PCNA was measured by Western Blot (WB) and qRT-PCR. Transwell assays were used to detect the invasion ability of ASVEC. Co-immunoprecipitation (Co-IP) was used to detect the binding of METTL14 to DGCR8. RNA Immunoprecipitation (RIP) was used to detect the binding of METTL14 to miR-19a.

結果:

M6A修飾レベルとMETTL14メチル化トランスフェラーゼはASVECで有意に過剰発現していた。METTL14をサイレンシングするとASVECの増殖と浸潤が抑制された。METTL14の低発現は、メチル化RNAとRNAスプライシング関連タンパク質DGCR8の結合を抑制した。さらに、METTL14をサイレンシングすると、miR-19aの発現が有意に抑制される一方で、一次的なpre-miR-19aの発現が促進された。しかし、METTL14の高発現は明らかにDGCR8とメチル化されたm6Aの発現を増加させた。さらに、miR-19aをサイレンシングすることにより、ASVECの増殖と浸潤が抑制された。

RESULTS: M6A modification levels and METTL14 methylation transferase were significantly overexpressed in ASVEC. Silencing METTL14 inhibited the proliferation and invasion of ASVEC. Low expression of METTL14 suppressed the binding of methylated RNA and RNA splicing related protein DGCR8. Moreover, silencing METTL14 significantly inhibited the expression of miR-19a while promoted the expression of primary pre-miR-19a. However, high expression of METTL14 obviously increased the expression of DGCR8 and methylated m6A. Furthermore, silencing miR-19a inhibited the proliferation and invasion of ASVEC.

結論:

METTL14はpri-miR-19aのM6A修飾を増加させ、成熟したmiR-19aの処理を促進し、ASVECの増殖と浸潤を促進した。これらの結果から、METTL14/M6A/miR-19aシグナル伝達経路が動脈硬化治療の新たなターゲットとなる可能性が示唆された。

CONCLUSIONS: METTL14 increased the M6A modification of pri-miR-19a and promoted the processing of mature miR-19a, thus promoting the proliferation and invasion of ASVEC. These results suggested that METTL14/ M6A/ miR-19a signaling pathway may be a new target for atherosclerosis treatment.