トランスジーンをコードするアデノ随伴ウイルスベクターのための定量的な力価アッセイ

A Quantitative Potency Assay for Adeno-Associated Virus Vectors Encoding for the Transgene.

• Sem J Aronson
• Robert S Bakker
• Sascha Moenis
• Remco van Dijk
• Giulia Bortolussi
• Fanny Collaud
• Xiaoxia Shi
• Suzanne Duijst
• Lysbeth Ten Bloemendaal
• Giuseppe Ronzitti
• Andrés F Muro
• Federico Mingozzi
• Ulrich Beuers
• Piter J Bosma

抄録

臨床グレードのベクターロットの力価評価は、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターのリリースをサポートするために非常に重要であり、将来の販売承認に必要とされています。我々は、クリグラー・ナジャール症候群の治療のために現在臨床評価中の AAV8-h ベクターのトランスジェニック発現と活性の両方を検出する細胞ベースの定量的な力価アッセイを開発し、検証しました。AAV8-hの効力を評価した。ヒト肝腫7（Huh7）細胞に導入した後、フローサイトメトリーを用いてトランスジェニック陽性細胞を定量し、ビリルビンコンジュゲーションアッセイによりトランスジェニック活性を評価した。様々なAAV8-hUGT1A1バッチの効力を比較した。AAV8-h導入後、UGT1A1を発現する細胞の定量は直線的な用量反応関係（R=0.98）を示し、アッセイ内および日間の再現性は十分であった（変動係数[CV]=11.0％および22.6％）。また，ビリルビン結合試験では，低用量範囲では線形の用量反応関係（R=0.99）を示し，十分な測定内および日間再現性を示した（CV=15.7％および19.7％）。両方の力価アッセイは、AAV8-hベクターロットの有効性に確実に変換されます。AAV8-h の細胞ベースの力価測定法は、トランスジェニック UGT1A1 の発現および活性を適切に判定し、有効性と一致しています。この新しいアプローチは、臨床グレードのベクターリリースをサポートするためのベクターロットの力価の決定に適しています。

Potency assessment of clinical-grade vector lots is crucial to support adeno-associated virus (AAV) vector release and is required for future marketing authorization. We have developed and validated a cell-based, quantitative potency assay that detects both transgenic expression and activity of an AAV8-h vector, which is currently under clinical evaluation for the treatment of Crigler-Najjar syndrome. Potency of AAV8-h was evaluated . After transduction of human hepatoma 7 (Huh7) cells, transgene-positive cells were quantified using flow cytometry and transgenic activity by a bilirubin conjugation assay. The potency of various AAV8-hUGT1A1 batches was compared with their potency . After AAV8-h transduction, quantification of UGT1A1-expressing cells shows a linear dose-response relation (R = 0.98) with adequate intra-assay and inter-day reproducibility (coefficient of variation [CV] = 11.0% and 22.6%, respectively). In accordance, bilirubin conjugation shows a linear dose-response relation (R = 0.99) with adequate intra- and inter-day reproducibility in the low dose range (CV = 15.7% and 19.7%, respectively). Both potency assays reliably translate to efficacy of AAV8-h vector lots. The described cell-based potency assay for AAV8-h adequately determines transgenic UGT1A1 expression and activity, which is consistent with efficacy. This novel approach is suited for the determination of vector lot potency to support clinical-grade vector release.

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