アポリポ蛋白質(a)の単一部位に結合したマウスモノクローナル抗体LPA-KIV9の生成と特性評価

Generation and characterization of LPA-KIV9, a murine monoclonal antibody binding a single site on apolipoprotein(a).

• Ayelet Gonen
• Xiaohong Yang
• Calvin Yeang
• Elena Alekseeva
• Marlys Koschinsky
• Joseph L Witztum
• Michael B Boffa
• Sotirios Tsimikas

抄録

リポタンパク質（a）[Lp（a）]は心血管疾患の危険因子であり、治療の対象であるが、Lp（a）の測定は世界的に標準化されていない。市販の測定法は一般に、Lp(a)のクリングル(K)IV2リピート領域内の複数の部位を検出するポリクローナル抗体を使用しており、血漿中濃度の不正確な評価につながる可能性があります。心血管系の危険因子としての Lp(a) の認識が高まっており、新たな治療法の開発が活発に行われていることから、Lp(a) 測定のアイソフォーム非依存性を提供することができる試薬の広範な利用可能性が最も重要である。この問題に対処するために、我々は、アポリポ蛋白質（a）上の1つのサイトのみに結合するマウスモノクローナル抗体を生成しました。BALB/Cマウスを、KIV2の1コピーのみを含む8つの合計KIVリピートを含むアポリポ蛋白質(a)の切り捨てバージョンで免疫化した。我々はハイブリドーマを作製し、それらをスクリーニングし、LPA-KIV9と名付けられたKIV2非依存性モノクローナル抗体の作製に成功した。LPA-KIV9はプラスミノーゲンに結合せずにKIV9に結合することがわかった。また、LPA-KIV9はKIV9上の配列4076LETPTVV4082に結合していることをファインペプチドマッピングにより明らかにした。結論として、モノクローナル抗体LPA-KIV9の生成は、基礎研究研究やLp(a)測定の臨床応用において有用な試薬となる可能性がある。

Lipoprotein(a) [Lp(a)] is a risk factor for cardiovascular disease and a target of therapy, but Lp(a) measurements are not globally standardized. Commercially-available assays generally use polyclonal antibodies that detect multiple sites within the kringle (K) IV2 repeat region of Lp(a) and may lead to inaccurate assessments of plasma levels. With increasing awareness of Lp(a) as a cardiovascular risk factor and the active clinical development of new potential therapeutic approaches, the broad availability of reagents capable of providing isoform-independence of Lp(a) measurements is paramount. To address this issue, we generated a murine monoclonal antibody that binds to only one site on apolipoprotein(a). A BALB/C mouse was immunized with a truncated version of apolipoprotein(a) that contained eight total KIV repeats, including only one copy of KIV2. We generated hybridomas, screened them and successfully produced a KIV2-independent monoclonal antibody, named LPA-KIV9. Using a variety of truncated apolipoprotein(a) constructs to map its binding site, we found that LPA-KIV9 binds to KIV9, without binding to plasminogen. Fine peptide mapping revealed that LPA-KIV9 bound to the sequence 4076LETPTVV4082 on KIV9. In conclusion, the generation of monoclonal antibody LPA-KIV9 may be a useful reagent in basic research studies and in the clinical application of Lp(a) measurements.

Published under license by The American Society for Biochemistry and Molecular Biology, Inc.