脳内出血ラットにおけるNLRP3炎症性小胞に対する鍼治療の効果

[Effect of acupuncture on NLRP3 inflammatory corpuscle in rats with intracerebral hemorrhage].

• Hao Liu
• Beng Zhang
• Jia Du
• Pei-Pei Feng
• Chen Ruan
• Wei-Bo Zhang
• Zhong-Hua Zhu
• Chi Zhou
• Xin-Wei Li

抄録

目的:

脳内出血ラットにおけるNLRP3炎症性小胞に対する「白匯」(GV 20)から「Qubin」(GB 7)への鍼灸治療の効果を観察し、脳内出血ラットにおける神経機能の回復促進に対する鍼灸治療の作用機序を探ること。

OBJECTIVE: To observe the effect of acupuncture at "Baihui" (GV 20) through "Qubin" (GB 7) on NLRP3 inflammatory corpuscle in rats with intracerebral hemorrhage (ICH), and to explore the action mechanism of acupuncture on promoting the recovery of neural function in rats with ICH.

方法:

SPF 6 週齢の雄 SD ラット 40 頭を、偽手術群、モデル群、非鍼灸群、鍼灸群に無作為に分け、各群 10 頭ずつ投与した。モデル群、非アキュポイント群、鍼灸群のラットには自己血注入を行い、ICHモデルを作成したが、偽手術群のラットには手術のみを行い、自己血注入は行わなかった。モデル構築後約3時間後に、鍼灸群のラットには「白匯」（GV 20）から「Qubin」（GB 7）を介して12時間に1回、7日間鍼灸介入を行い、非鍼灸群のラットには患側の非鍼灸部［「白匯」（GV 20）と平行に、正中線の横1cm］に鍼灸介入を行い、その他の治療は鍼灸群と同様に行った。介入の終わりに、各グループの複合神経機能スコアを評価し、HE染色によって出血性ペンブラの組織形態を観察し、免疫組織化学によって脳内のNLRP3炎症性小胞の発現を検出し、ウェスタンブロットの方法によって脳内のNLRP3、インターロイキン-1β（IL-1β）およびインターロイキン-18（IL-18）の相対的なタンパク質発現レベルを検出しました。

METHODS: Forty SPF six-week-old male SD rats were randomly divided into a sham operation group, a model group, a non-acupoint group and an acupuncture group, 10 rats in each group. The rats in the model group, non-acupoint group and acupuncture group were intervened with autologous blood injection to prepare ICH model, while the rats in the sham operation group were only intervened with operation but not injection with autologous blood. About 3 hours after the establishment of the model, the rats in the acupuncture group were intervened with acupuncture at "Baihui" (GV 20) through "Qubin" (GB 7), once every 12 hours, for 7 days; the rats in the non-acupoint group were intervened with acupuncture at the non-acupoint [parallel to the "Baihui" (GV 20), 1 cm next to the midline] on the affected side, and other treatment was the same as the acupuncture group. At the end of the intervention, the composite nerve function score of each group was evaluated; the histomorphology of the hemorrhage penumbra was observed by HE staining; the expression of NLRP3 inflammatory corpuscle in the brain was detected by immunohistochemistry; the relative protein expression levels of NLRP3, interleukin-1β (IL-1β) and interleukin-18 (IL-18) in brain were detected by the method of Western blot.

結果:

介入7日後、モデル群では偽手術群と比較して、各項目スコアおよび複合神経機能の総スコアが有意に低下した（<0.01、<0.05）。モデル群では、脳神経細胞の浮腫、核酸沈着、壊死細胞症、炎症性細胞浸潤が認められました。モデル群、非鍼灸群と比較して、鍼灸群では複合神経機能の総得点、手足の対称運動(LS)と触手の親指知覚(VP)の得点が上昇し(<0.01、<0.05)、細胞壊死と炎症性細胞浸潤が緩和された。偽手術群と比較して、モデル群の脳組織におけるNLRP3炎症性大脳皮質発現およびNLRP3、IL-1β、IL-18の相対的な蛋白質発現量は増加し（<0.01）、モデル群および非鍼灸群と比較して、鍼灸群の脳組織におけるNLRP3炎症性大脳皮質発現およびNLRP3、IL-1β、IL-18の相対的な蛋白質発現量は減少し（<0.01）、細胞壊死および炎症細胞浸潤は緩和された。

RESULTS: Seven days into intervention, compared with the sham operation group, each item score and total score of composite nerve function in the model group were significantly reduced (<0.01, <0.05). There was edema and karyopyknosis in brain neuron as well as necrocytosis and inflammatory cell infiltration in the model group. Compared with the model group and the non-acupoint group, the total score of composite nerve function and the scores of symmetrical movement of limbs (LS) and proprioception of tentacles (VP) in the acupuncture group were increased (<0.01, <0.05), and the cell necrosis and inflammatory cell infiltration were relieved. Compared with the sham operation group, NLRP3 inflammatory corpuscle expression and the relative protein expression levels of NLRP3, IL-1β and IL-18 in brain tissue in the model group were increased (<0.01); compared with the model group and the non-acupoint group, NLRP3 inflammatory corpuscle expression and the relative protein expression levels of NLRP3, IL-1β and IL-18 in brain tissue in the acupuncture group were reduced (<0.01).

結論:

白匯」（GV 20）と「Qubin」（GB 7）の鍼治療は、ICH ラットの脳組織における NLRP3、IL-1β、IL-18 の発現を低下させ、炎症反応を抑制し、神経機能の回復を促進することができました。

CONCLUSION: Acupuncture at "Baihui" (GV 20) through "Qubin" (GB 7) could downregulate the expression of NLRP3, IL-1β and IL-18 in the brain tissue of ICH rats, inhibit the inflammatory response, and promote the recovery of neural function.