cGMP条件下でのヒト誘導多能性幹細胞培養法

Human-Induced Pluripotent Stem Cell Culture Methods Under cGMP Conditions.

• Teresa Rivera
• Yuanyuan Zhao
• Yuhui Ni
• Jiwu Wang

抄録

誘導多能性幹細胞（iPSCs）の発見は、再生医療における細胞治療へのアプローチに革命をもたらしました。胚性のような多能性状態に体細胞を再プログラムすることで、あらゆる系統の患者特異的な細胞の貴重なリソースを提供します。堅牢で一貫性のある高品質のiPSC製造を保証するためには、現在の優良製造基準（cGMP）の要件に適合した手順とプロトコルの実施が不可欠です。Allele Biotechnology社で開発された、cGMP条件下でのiPSC作製のための技術は、フットプリントフリー、フィーダーフリー、キセノフリーのリプログラミング法による多能性幹細胞の導出のための強力なプラットフォームである。Allele Biotechnology社が確立したcGMPプロセスは、組織採取、細胞リプログラミング、細胞増殖、細胞バンキング、品質管理試験に至るまでの製造プロセス全体が採用されている完全にcGMPに準拠したiPSCラインを包含しています。以前、本連載では、mRNAのみを用いてiPSCを作製する方法と、それをcGMP条件下で行う方法を説明した。今回は、cGMP基準に準拠した試薬、材料、装置を用いて、cGMP-iPSCを培養、検査、保存する方法を詳しく説明します。 © 2020 The Authors.基本プロトコール1：iPSCの解離 サポートプロトコール1：幹細胞培地 サポートプロトコール2：ROCKインヒビター調製 サポートプロトコール3：ビトロネクチンコーティング 基本プロトコール2：iPSCの凍結保存 基本プロトコール3：iPSCの解凍。

The discovery of induced pluripotent stem cells (iPSCs) revolutionized the approach to cell therapy in regenerative medicine. Reprogramming of somatic cells into an embryonic-like pluripotent state provides an invaluable resource of patient-specific cells of any lineage. Implementation of procedures and protocols adapted to current good manufacturing practice (cGMP) requirements is critical to ensure robust and consistent high-quality iPSC manufacturing. The technology developed at Allele Biotechnology for iPSC generation under cGMP conditions is a powerful platform for derivation of pluripotent stem cells through a footprint-free, feeder-free, and xeno-free reprogramming method. The cGMP process established by Allele Biotechnology entails fully cGMP compliant iPSC lines where the entire manufacturing process, from tissue collection, cell reprogramming, cell expansion, cell banking and quality control testing are adopted. Previously, we described in this series of publications how to create iPSCs using mRNA only, and how to do so under cGMP conditions. In this article, we describe in detail how to culture, examine and storage cGMP-iPSCs using reagents, materials and equipment compliant with cGMP standards. © 2020 The Authors. Basic Protocol 1: iPSC Dissociation Support Protocol 1: Stem cell media Support Protocol 2: ROCK inhibitor preparation Support Protocol 3: Vitronectin coating Basic Protocol 2: iPSC Cryopreservation Basic Protocol 3: iPSC Thawing.

© 2020 The Authors.