逆遺伝学的システムによって作成されたウサギE型肝炎ウイルスへの持続感染

Persistent Infection with a Rabbit Hepatitis E Virus Created by a Reverse Genetics System.

• Wenjing Zhang
• Yasushi Ami
• Yuriko Suzaki
• Hai Yen Doan
• Suljid Jirintai
• Masaharu Takahashi
• Hiroaki Okamoto
• Naokazu Takeda
• Masamichi Muramatsu
• Tian-Cheng Li

抄録

ウサギＥ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）は、新規の人獣共通感染症である。このウイルスを増殖させるための細胞培養系は確立されているが、ウイルスを発生させるための逆遺伝学的システムは現在のところ存在しない。本研究では、インビトロ転写により生成したキャップ付きウサギHEV RNAをPLC/PRF/5細胞にトランスフェクションし、回収したウイルスを細胞内でパサージュした。細胞培養上清は抗HEV抗体陰性のウサギに静脈内接種および経口接種で感染可能であり，逆遺伝系で生成されたウサギHEVは感染性があることが示された．ゲノムワイド解析の結果，トランスフェクション後の細胞培養上清から回収したウイルスゲノムと，感染ウサギの糞便検体から回収したウイルスゲノムでは，ヌクレオチド配列の変化は認められなかった．広範囲の抗ウイルス剤であるリバビリンは、生体外でのウイルス複製を効率的に阻害し、ウイルス感染ウサギのウイルス増殖を一過性に抑制したことから、本試薬は治療薬の候補であることが示唆された。また、ウサギHEVのウサギへの感染は持続感染を引き起こし、ウイルス感染ウサギはウイルス性肝炎の動物モデルとなりうることが示唆された。逆遺伝学的手法を用いて作製した感染性ウサギHEVは、HEVの複製機構やウイルス性肝炎の病態解明に有用であると考えられる。

Rabbit hepatitis E virus (HEV) is a novel zoonotic infectious agent. Although a cell culture system to grow the virus has been established, there is currently no reverse genetics system for generating the virus. In this study, capped genomic rabbit HEV RNAs generated by in vitro transcription were transfected into PLC/PRF/5 cells, and the recovered viruses were subsequently passaged in the cells. The cell culture supernatant was capable of infecting rabbits negative for anti-HEV antibody by intravenous and oral inoculation, indicating that rabbit HEV generated by the reverse genetic system is infectious. Genome-wide analyses indicated that no nucleotide sequence change occurred in the virus genomes that were recovered from the cell culture supernatant after transfection and passaged one time or in the virus genomes recovered from fecal specimens of the infected rabbits. Ribavirin, a broad spectrum antiviral inhibitor, efficiently abrogated virus replication ex vivo and transiently suppressed the virus growth in the virus-infected rabbits, suggesting that this reagent is a candidate for therapeutic treatment. In addition, transmission of rabbit HEV to rabbits caused persistent infection, suggesting that the virus-infected rabbit could be an animal model for virus-induced hepatitis. The infectious rabbit HEV produced by a reverse genetics system would be useful to elucidate the mechanisms of HEV replication and the pathogenesis of viral hepatitis.

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