ロイシンリッチリピートキナーゼ2 G2019Sキャリアの末梢血単核細胞におけるインビトロキナーゼ活性の上昇。新規な酵素リンク免疫吸着アッセイベースの方法

Elevated In Vitro Kinase Activity in Peripheral Blood Mononuclear Cells of Leucine-Rich Repeat Kinase 2 G2019S Carriers: A Novel Enzyme-Linked Immunosorbent Assay-Based Method.

• Katerina Melachroinou
• Min Suk Kang
• Christopher Liong
• Sushma Narayan
• Najah Levers
• Neal Joshi
• Katie Kopil
• Samantha J Hutten
• Marco A S Baptista
• Shalini Padmanabhan
• Un Jung Kang
• Leonidas Stefanis
• Roy N Alcalay
• Hardy J Rideout

抄録

背景:

ロイシンリッチリピートキナーゼ2キナーゼ阻害剤は、潜在的な治療オプションとして精力的に追求されているが、ロイシンリッチリピートキナーゼ2の機能と標的の関与に関する感度の高い定量的なアッセイが非常に必要とされている。

BACKGROUND: Leucine-rich repeat kinase 2 kinase inhibitors are being vigorously pursued as potential therapeutic options; however, there is a critical need for sensitive and quantitative assays of leucine-rich repeat kinase 2 function and target engagement.

目的:

我々の目的は、末梢血単核細胞の収集および保存プロトコルを比較し、PDコホートにおけるロイシンリッチリピートキナーゼ2のダウンストリーム分析のための最適な条件を決定することであった。

OBJECTIVES: Our objective was to compare collection and storage protocols for peripheral blood mononuclear cells, and to determine the optimal conditions for downstream analyses of leucine-rich repeat kinase 2 in PD cohorts.

方法:

ここでは、ヒト組織におけるロイシンリッチリピートキナーゼ2の内因性レベルでの機能の多面的な検出が可能な酵素結合免疫吸着アッセイをベースとしたアッセイについて述べる。

METHODS: Here, we describe enzyme-linked immunosorbent assay-based assays capable of detecting multiple aspects of leucine-rich repeat kinase 2 function at endogenous levels in human tissues.

結果:

我々は、ロイシンリッチリピートキナーゼ2のG2019S変異を持つ健常者および罹患者の末梢血単核細胞を用いて、特発性PD患者におけるpS935/ロイシンリッチリピートキナーゼ2の有意な増加を検出しながら、in vitroキナーゼ活性が有意に上昇したことを初めて報告する。

RESULTS: In peripheral blood mononuclear cells from both healthy and affected carriers of the G2019S mutation in leucine-rich repeat kinase 2, we report, for the first time, significantly elevated in vitro kinase activity, while detecting a significant increase in pS935/leucine-rich repeat kinase 2 in idiopathic PD patients.

結論:

ここで述べたような定量的なアッセイは、病気の進行を予測し、患者の層別化を助け、今後の臨床試験の重要な要素となるロイシンリッチリピートキナーゼ2の機能の特異的なマーカーを明らかにする可能性がある。

CONCLUSIONS: Quantitative assays such as these described here could potentially uncover specific markers of leucine-rich repeat kinase 2 function that are predictive of disease progression, aid in patient stratification, and be a critical component of upcoming clinical trials. © 2020 International Parkinson and Movement Disorder Society.

© 2020 International Parkinson and Movement Disorder Society.