採血方法と血漿の長期保存がクォーラムセンシングペプチドの安定性に与える影響

Influence of Blood Collection Methods and Long-Term Plasma Storage on Quorum-Sensing Peptide Stability.

• Nathan Debunne
• Anton De Spiegeleer
• Dorian Depuydt
• Yorick Janssens
• Amélie Descamps
• Evelien Wynendaele
• Bart De Spiegeleer

抄録

迅速かつ正確な疾患の検出、予後、および治療のための適切なバイオマーカーを見つけることは、ますます重要になってきている。定量センシングペプチドは、細菌、真菌、原生動物、ウイルスによって産生される新たなグループであり、血液は、それらを検出/定量するための最も簡単なサンプルタイプである。しかし、これらのクォーラムセンシングペプチドを測定するための適切な血液サンプルの収集方法や保存条件についての詳細な情報は、さらなる臨床研究と開発を妨げている。ここで、我々はまず、化学的に多様な一連の定足数検出ペプチドの時間依存性の安定性を試験した。次に、異なる温度(4、-35、および-80℃)での血漿中でのこれらのクォーラムセンシングペプチドの保存安定性を決定した。UPLC/MS-MSを用いて、スパイクされたクォーラムセンシングペプチドを選択的に検出し、定量した。この研究の結果は、従来のプロテオミクス用に設計され、４℃で保存された費用対効果の高いチューブが、ヒト血漿中のノルムセンシングペプチドを検出／定量する必要がある場合に好ましい収集条件であることを示している。室温(21℃)で取り扱う場合は、より特殊なチューブが必要となります。低温条件下(-80℃)であっても、血漿サンプルの長期保存は、特定のノルムセンシングペプチドの急速な分解を示す。

Finding adequate biomarkers for rapid and accurate disease detection, prognosis, and therapy is increasingly important. Quorum-sensing peptides are herein a new emerging group, produced by bacteria, fungi, protozoa, and viruses, with blood being the most straightforward sample type to detect/quantitate them. However, detailed information about suitable blood sample collection methods and storage conditions for measuring these quorum-sensing peptides hampers further clinical research and development. Here, we first tested the time-dependent stability of a set of chemically diverse quorum-sensing peptides, spiked in blood at different temperatures (4, 21, and 37 °C) in four different ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)-containing plasma tubes (with different protein-stabilizing additives) over a period of up to 7.5 h. Next, we determined the storage stability of these quorum-sensing peptides in plasma at different temperatures (4, -35, and -80 °C). UPLC/MS-MS was used to selectively detect and quantify the spiked quorum-sensing peptides. The results of this study indicate that a cost-effective tube, designed for traditional proteomics and stored at 4 °C, is the preferred collection condition when quorum-sensing peptides need to be detected/quantified in human plasma. When the tubes are handled at room temperature (21 °C), a more specialized tube is required. Long-term storage of plasma samples, even under low-temperature conditions (-80 °C), indicates rapid degradation of certain quorum-sensing peptides.

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