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多次元高速液体クロマトグラフィーと元素分析装置/同位体比質量分析装置を用いた、未開封の個々のアミノ酸の安定した炭素同位体測定法
A method for stable carbon isotope measurement of underivatized individual amino acids by multi-dimensional high-performance liquid chromatography and elemental analyzer/isotope ratio mass spectrometry.
PMID: 32656862 DOI: 10.1002/rcm.8885.
抄録
ラショナル:
個々のアミノ酸(AA)のδC分析の精度と精度を向上させるために、多次元高速液体クロマトグラフィー(HPLC)と元素分析装置/同位体比質量分析装置(EA/IRMS)をベースとした新しい分析法を開発しました。この手法は、ガスクロマトグラフィーを用いた従来の分析法とは異なり、プレカラムでの化学的誘導体化が不要であるため、同位体測定に伴う系統的な誤差を低減することができます。
RATIONALE: To achieve better precision and accuracy for δ C analysis of individual amino acids (AAs), we have developed a new analytical method based on multi-dimensional high-performance liquid chromatography (HPLC) and elemental analyzer/isotope ratio mass spectrometry (EA/IRMS). Unlike conventional methods using gas chromatography, this approach omits pre-column chemical derivatization, thus reducing systematic errors associated with the isotopic measurement.
方法:
15種類のAAと生物学的試料であるヒイカ（Heterololigo bleekeri）を含む標準混合物中の個々のAAの分離と単離を行った。逆相カラムと混合モードカラムを備えたＨＰＬＣシステムを用いてＡＡｓを単離し、フラクションコレクターを用いて回収した。クロマトグラフィー分離後、さらにHPLCで精製した後、AAのδC値をEA/IRMSで測定した。
METHODS: The separation and isolation of individual AAs in a standard mixture containing 15 AAs and a biological sample, spear squid (Heterololigo bleekeri), were performed. AAs were isolated using a HPLC system equipped with a reversed-phase column and a mixed-mode column and collected using a fraction collector. After the chromatographic separation and further post-HPLC purification, the δ C values of AAs were measured by EA/IRMS.
結果:
標準混合物中の15個のすべてのAAの完全な単離が達成された。これらのAAの実験前後のδC値は良好に一致していた。また、生物学的試料であるH. bleekeriに含まれる15種類のAAを測定することに成功した。H. bleekeri中のAAのδC値は30‰もの差があり、グリシンが最も濃縮されていた。
RESULTS: The complete isolation of all 15 AAs in the standard mixture was achieved. The δ C values of these AAs before and after the experiment were in good agreement. Also, 15 AAs in the biological sample, H. bleekeri, were successfully measured. The δ C values of AAs in H. bleekeri varied by as much as as 30‰ with glycine being most enriched in C.
結論:
リファレンスと処理されたAAのδC値の間の一貫性は、実験手順が分画効果や汚染の影響を受けない正確なδC値を生成することを示しています。この方法は、従来のアプローチよりも高い精度で生物学的試料のδC分析に適しています。我々は、生物学的、生態学的および生物地球化学的研究におけるAAのδC値を測定するためのツールとして、この新しい方法を提案します。
CONCLUSIONS: The consistency between the δ C values of reference and processed AAs demonstrates that the experimental procedure generates accurate δ C values unaffected by fractionation effects and contamination. This method is therefore suitable for δ C analysis of biological samples with higher precision than conventional approaches. We propose this new method as a tool to measure δ C values of AAs in biological, ecological and biogeochemical studies.
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