ドコサヘキサエン酸は、肺動脈平滑筋細胞のmicroRNA-16をアップレギュレートすることでCa流入を抑制し、CaSRをダウンレギュレートする

Docosahexaenoic acid inhibits Ca influx and downregulates CaSR by upregulating microRNA-16 in pulmonary artery smooth muscle cells.

• Jin-Jun Liu
• Ming-Ming Tang
• Ming-Li Zhu
• Cai-Xia Xie
• Pin-Fang Kang
• Xuan Ling
• Heng Zhang
• Xiao-Jing Wang
• Bi Tang

抄録

ドコサヘキサエン酸（DHA）は肺動脈性高血圧症（PAH）を改善する可能性が報告されているが、その具体的なメカニズムは不明である。本研究では、肺動脈平滑筋細胞（PASMCs）におけるDHAの機能を調べ、その根底にあるメカニズムを探ることを目的としています。本研究では、DHAを用いてPASMCsをインキュベートした。細胞質自由Ca濃度（[Ca ]cyt）はFluo-3 AM法を用いて測定した。リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応を用いて、microRNA-16（miR-16）およびカルシウム感知受容体（CaSR）メッセンジャーRNAの発現レベルを検出した。DHAのPASMCsの増殖・遊走に対する効果を検出するために、CCK-8アッセイ、BrdUアッセイ、Transwellアッセイを用いた。CaSRは、デュアルルシフェラーゼアッセイ、ポリメラーゼ連鎖反応、ウェスタンブロット解析を用いて、miR-16の直接の標的であることを確認した。その結果、DHA は PASMC の増殖・遊走を有意に抑制し、CaSR を減少させることがわかった。また，miR-16 ミミックを導入した場合には，PASMC の増殖・遊走能が有意に抑制されたが，miR-16 阻害後には逆の効果が認められた。Ca ]cytもmiR-16阻害により阻害された。また、DHAはmiR-16の発現を促進し、miR-16を阻害するとPASMCsに対するDHAの効果は消失した。CaSRはmiR-16の直接の標的として同定された。CaSRはmiR-16によって直接阻害され、DHAによって間接的に阻害された。以上のことから、DHAはPASMCsの増殖・遊走を抑制し、miR-16/CaSR軸を制御することでPAHを改善する可能性があると考えられた。

Docosahexaenoic acid (DHA) is reported to have the potential to ameliorate pulmonary arterial hypertension (PAH), while the specific mechanism is still obscure. This study aims to investigate the function of DHA in pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs) and explore the underlying mechanism. In our study, DHA was used to incubate PASMCs. Cytosolic-free Ca concentration ([Ca ]cyt) was measured using Fluo-3 AM method. Real-time polymerase chain reaction was used to detect microRNA-16 (miR-16) and calcium-sensing receptor (CaSR) messenger RNA expression levels. CCK-8 assay, BrdU assay, and Transwell assay were employed to detect the effects of DHA on proliferation and migration of PASMCs. CaSR was confirmed as a direct target of miR-16 using dual-luciferase assay, polymerase chain reaction, and Western blot analysis. It was found that DHA significantly inhibited PASMC proliferation and migration and decreased [Ca ]cyt. After transfection of miR-16 mimics, proliferation and migration ability of PASMCs were significantly inhibited, whereas opposite effects were observed after miR-16 inhibition. [Ca ]cyt was also inhibited by miR-16 transfection. DHA then promoted the expression of miR-16, and the effects of DHA on PASMCs were annulled when miR-16 was inhibited. CaSR was identified as a direct target of miR-16. CaSR was inhibited directly by miR-16 and indirectly by DHA. In conclusion, DHA inhibits the proliferation and migration of PASMCs, and probably ameliorates PAH via regulating miR-16/CaSR axis.

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