パクリタキセルに対する乳癌細胞株のCCND1 mRNAレベルおよび感作性に対するmiR-34a効果の評価

Evaluation of miR-34a Effect on CCND1 mRNA Level and Sensitization of Breast Cancer Cell Lines to Paclitaxel.

• Shiva Irani
• Mahsa Paknejad
• Masoud Soleimani
• Soleimani Azam

抄録

背景:

miR-34aは腫瘍抑制因子として、また腫瘍形成や癌の進行における複数の標的の発現調節因子として有効な役割を果たすことが明らかになってきた。本研究では、乳がん細胞に対するmiR-34aの単独またはパクリタキセルとの併用による潜在的な効果を評価することを目的とした。

Background: A growing body of literature has revealed the effective role of miR-34a, as a tumor suppressor and regulator of expression of multiple targets in tumorigenesis and cancer progression. This study aimed at evaluating the potential effects of miR-34a alone or in combination with paclitaxel on breast cancer cells.

方法:

乳癌のMCF-7およびMDA-MB-231細胞株にレンチウイルスベクターを用いてmiR-34aを導入した後、パクリタキセルで処理した細胞および未処理の細胞を対象に、MTTアッセイを用いて細胞生存率および細胞増殖におけるmiR-34aの発現上昇の影響を測定した。次に、ｑＲＴ-ＰＣＲアッセイを用いて、２つの細胞株において、ＣＣＣＮＤ１遺伝子のｍＲＮＡレベルを測定した。最後に、アポトーシスおよび細胞周期進行に対するmiR-34aとパクリタキセルの影響をフローサイトメトリーで調べた。

Methods: After miR-34a transduction by lentiviral vectors in two MCF-7 and MDA-MB-231 cell lines of breast cancer, effects of the elevated expression of miR-34a in the cell viability and the cell proliferation were determined using MTT assay in treated and untreated cells with paclitaxel. The mRNA level of the CCND1 gene was then measured in the two cell lines using the qRT-PCR assay. Finally, the influence of miR-34a and paclitaxel on apoptosis and cell cycle progression were examined by flow cytometry.

結果:

MCF-7およびMDA-MB-231細胞において、レンチウイルスmiR-34aの過剰発現によりCCND1 mRNAの発現レベルが有意に低下した。miR-34aとパクリタキセルを併用すると、単剤治療に比べて細胞の生存率と増殖が低下した。また、MDA-MB-231細胞では、miR-34aとパクリタキセルの併用により、2つのフェーズで細胞周期停止が出現した。

Results: The CCND1 mRNA expression levels were significantly down-regulated by overexpressed lentiviral miR-34a in MCF-7 and MDA-MB-231 cells. Combined treatment by miR-34a and paclitaxel reduced the cell viability and proliferation compared to single-drug treatment. In addition, the cell cycle arrest appeared at two phases by the combination of miR-34a and paclitaxel in MDA-MB-231 cells.

結論:

その結果、miR34aはパクリタキセルとの併用により、細胞の生存率や増殖を低下させる可能性があることが示唆された。さらに、パクリタキセルの効果とは無関係にCCND1 mRNAの発現を減少させることができる。

Conclusion: Our results suggest that miR34a, in combination with paclitaxel, has a potential for decreasing the cell viability and proliferation. Moreover, it can reduce the expression of CCND1 mRNA independent of the paclitaxel effect.