過形成抑制遺伝子は、rhoファミリータンパク質を標的にして神経膠腫細胞の増殖と転移を抑制する

Hyperplasia suppressor gene inhibits the proliferation and metastasis of glioma cells by targeting rho family proteins.

• Juncheng Wang
• Bin Zhang
• Haibo Liu
• Qiao Wu
• Peng Gao
• Yourui Zou
• Yanping Lan
• Qinghua Zhang

抄録

AIM:

ヒト神経膠腫細胞浸潤に対する過形成抑制遺伝子（HSG）の影響とその可能性のあるメカニズムを調べること。

AIM: To investigate the effect of the hyperplasia suppressor gene (HSG) on human glioma cell invasion and its possible mechanism.

方法:

ヒト神経膠腫U251細胞に、HSG遺伝子配列を有する組換えウイルスベクター（HSG過剰発現群）とHSG干渉配列を有する組換えウイルスベクター（HSG抑制群）を感染させた。また、無負荷ウイルス転写を行った陰性対照群と、PBS処理のみを行ったブランク対照群を設定した。Ｕ２５１グリオーマ細胞の増殖、遊走および浸潤に対するＨＳＧ発現の影響を検出するために、ＣＣＫ-８アッセイ、細胞スクラッチヒーリング試験、トランスウェル遊走および浸潤試験を行った。HSG 発現が U251 細胞の細胞骨格形成および接着能に及ぼす影響を解析するために、細胞免疫蛍光法および細胞接着試験を用いた。遺伝子チップ技術を用いて、Ｕ２５１細胞の固有遺伝子発現に及ぼすＨＳＧ発現変化の影響を予備的に探索した。Rhoファミリー鍵分子mRNAおよびタンパク質の発現を、光定量PCRおよびウエスタンブロットにより検出した。

METHODS: Human glioma U251 cells were infected with recombinant viral vectors carrying the HSG gene sequence (HSG overexpression group) and HSG interference sequence (HSG suppression group). The negative control group with no-load virus transcription and a blank control group with only PBS treatment were set up. CCK-8 assay, cell scratch healing test, transwell migration, and invasion test were used to detect the effect of HSG expression on proliferation, migration and invasion of U251 glioma cells. Cell immunofluorescence and cell adhesion test were used to analyze the effect of HSG expression on cytoskeleton formation and adhesion ability of U251 cells. Gene chip technology was employed to preliminarily explore the effect of HSG expression change on the inherent gene expression in U251 cells. The expression of Rho family key molecule mRNA and protein was detected by light quantitative PCR and western blot.

結果:

組換えウイルスベクターを用いて転写した細胞は、24時間後に倒立蛍光顕微鏡下で緑色を呈した。HSG発現は、HSG過剰発現群（<0.01）で増加し、HSG阻害群（<0.01）で減少した。2つの対照群と比較して、HSG過剰発現群では増殖、傷治癒率、遊走細胞数、浸潤細胞数、接着細胞数が著しく低下していた。HSG過剰発現後、U251細胞の形態は変化し、糸状仮足は短縮し、部分的にフレーク状になった。しかし、HSG阻害後は、仮足は両端に向かって成長し、軸方向に配列していた。また、HSGの過剰発現により、Rhoファミリータンパク質（RhoA, Rock1, Rock2, Rac1, Cdc42）の発現が抑制された。

RESULTS: After 24 h of transcription with the recombinant virus vector, the cells showed a green color under an inverted fluorescence microscope. HSG expression increased in the HSG overexpression group ( < 0.01), and decreased in the HSG inhibition group ( < 0.01). Compared with the two control groups, the proliferation, scratch healing rate, migrating cell number, invasive cell number and adhesion cell number in the HSG overexpression group were markedly lower. After HSG overexpression, the morphology of U251 cells changed; filamentous pseudopods shortened and partially flaked. However, after HSG inhibition, the pseudopods grew toward both ends and were arranged axially. The overexpression of HSG inhibited the expression of rho family proteins (RhoA, Rock1, Rock2, Rac1, and Cdc42).

結論:

HSG の過剰発現は rho ファミリー蛋白質の発現を調節することで、神経膠腫 U251 細胞の進行を抑制することを明らかにした。

CONCLUSION: The overexpression of HSG inhibits the progression of glioma U251 cells by regulating the expression of rho family proteins.

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