大腸癌細胞におけるプログラムされた死のリガンド2（PD-L2）の発現を増加させるが、4-1BBリガンドの発現は増加させない

Increasing the expression of programmed death ligand 2 (PD-L2) but not 4-1BB ligand in colorectal cancer cells.

• Parastoo Shakerin
• Bijan Sedighi Moghadam
• Kaveh Baghaei
• Zahra Safaei Naraghi
• Kambiz Kamyab Hesari
• Hamid Asadzadeh Aghdaei
• Raheleh Shokouhi Shoormasti
• Mohammad Sadegh Fazeli
• Maryam Nourizadeh

抄録

免疫チェックポイント（ICP）分子は、T細胞の活性化を誘導または防止することで免疫応答を調節する。悪性細胞上のいくつかの ICP の過剰発現は、抗腫瘍免疫応答を制御することが示されている。我々は、これまで大腸がん（CRC）患者では広く研究されていなかった2つの免疫チェックポイント分子の発現レベルを調べることを目的とした。CRC 患者の腫瘍組織において、隣接する正常組織と比較して、プログラムされた死のリガンド 2（共阻害性）と 4-1BB リガンド（共刺激性）の発現を評価した。CRC患者21名の外科手術中の組織切除後、RNA抽出、cDNA合成、半定量的リアルタイムPCRを行い、PD-L2および4-1BBBL遺伝子の発現を測定した。タンパク質レベルでは、組織切片を用いて間接免疫組織化学検査（IHC）を行った。その結果、PD-L2は約81％のCRCで発現しており、腫瘍分化グレードとの間に有意な相関がないことが明らかになった。腫瘍組織では、隣接する正常組織と比較してPD-L2の遺伝子発現に3.25倍の変化が認められたが（P=0.005）、相手組織では4-1BBLの発現低下は有意ではなかった。PDL-2（P=0.02）と4-1BBLについてはIHCで確認されたが、後者については統計的に有意ではなかった。有意ではなかったが、PD-L2の発現上昇と腫瘍の分化度との間に関連性を見いだすことができた。PD-L2のような抗腫瘍免疫応答の陰性調節因子の発現増加は、腫瘍脱出の有力な手段として、ブロッキングモノクローナル抗体を用いたCRC患者へのがん免疫療法のアプローチが考えられます。

Immune checkpoint (ICP) molecules modulate the immune response by either inducing or preventing T cell activation. Over-expression of some ICPs on malignant cells has been shown to regulate anti-tumor immune responses. We aimed to investigate the expression levels of two immune checkpoint molecules which have not been studied extensively in patients with colorectal cancer (CRC). Programmed Death Ligand 2 (co-inhibitory) and 4-1BB ligand (co-stimulatory) were assessed in tumor tissues of CRC patients compared to the adjacent normal tissues. Following tissue excision during surgical operation from 21 CRC patients, RNA extraction, cDNA synthesis and semi-quantitative real-time PCR were done for measuring the expressions of PD-L2 and 4-1BBL genes. In protein level, indirect immunohistochemistery (IHC) was performed on tissue sections. We revealed that PD-L2 was expressed in about 81% CRCs and insignificantly correlated with the tumor differentiation grade. Although a 3.25-fold change in the gene expression of PD-L2 was found in tumor tissues compared to the adjacent normal tissues (P = 0.005), but decreased level of 4-1BBL in counterpart tissues was not significant. Our results were confirmed by IHC for PDL-2 (P = 0.02) and 4-1BBL, however it was not statistically significant for the latter one. Although not significant, we could find an association between the elevated expression of PD-L2 and the tumor differentiation grade. Increased expression of negative regulator of the anti-tumor immune responses like PD-L2, as a prominent way of tumor escape, can be considered for cancer immunotherapy approaches in CRC patients using blocking monoclonal antibodies.