ヒト血漿および尿中のカナグリフロジン、ダパグリフロジン、エンパグリフロジンを同時に定量するためのシンプルで高速かつ堅牢なLC-MS/MS法

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J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci..2020 Jun;1152:122257. S1570-0232(20)30276-2. doi: 10.1016/j.jchromb.2020.122257.Epub 2020-06-26.

ヒト血漿および尿中のカナグリフロジン、ダパグリフロジン、エンパグリフロジンを同時に定量するためのシンプルで高速かつ堅牢なLC-MS/MS法

Simple, fast and robust LC-MS/MS method for the simultaneous quantification of canagliflozin, dapagliflozin and empagliflozin in human plasma and urine.

Annemarie B van der Aart-van der Beek
A Mireille A Wessels
Hiddo J L Heerspink
Daan J Touw

PMID: 32663790 DOI: 10.1016/j.jchromb.2020.122257.

抄録

ナトリウム-グルコースコトランスポーター2-インヒビター（SGLT2i）は、経口の糖質低下薬であり、心保護効果や腎保護効果も実証されている。SGLT2iは2型糖尿病の治療においてますます重要な役割を果たしている。ここでは、ヒト血漿、血清、尿中の3つのSGLT2i（カナグリフロジン、ダパグリフロジン、エンパグリフロジン）の同時定量のための簡単で堅牢な液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法（LC-MS/MS）を1分間の実行時間で報告します。タンパク質沈殿剤としてメタノールを使用した。クロマトグラフィー分離は、Waters ACQUITY UPLC HSS T3 1.8μm VanGuard Pre-column; 2.1×50mmカラムを使用し、移動相として酢酸アンモニウム20mM (pH 5)およびアセトニトリルを用いたグラジエント溶出を用いて、0.8ml/minの流速で行った。酢酸付加体イオンの質量分析は、負イオン化とSRMモードのエレクトロスプレーを用いて行った。選択性、直線性、精度と精度、希釈の完全性、安定性と回収率を含むFDAとEMAのガイドラインに基づいてアッセイの妥当性を検証しました。200μlのサンプル量で、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、エンパグリフロジンについて、それぞれ10-5000μg/L、1-500μg/L、2-1000μg/Lのリニアレンジが達成されました。また、ダパグリフロジンとエンパグリフロジンを用いた2つの薬物動態試験に本法を適用することに成功した。結論として、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、エンパグリフロジンの同時定量のためのシンプルで高速かつ堅牢なLC-MS/MS法を開発し、検証しました。

Sodium-glucose cotransporter 2 -inhibitors (SGLT2i) are oral glucose-lowering drugs that have also demonstrated cardioprotective and renoprotective effects. SGLT2i play an increasingly important role in the treatment of type 2 diabetes. Here we report a simple and robust liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for the simultaneous quantification of three SGLT2i (canagliflozin, dapagliflozin and empagliflozin) in human plasma, serum and urine with a runtime of 1 min. Methanol was used as protein precipitating agent. Chromatographic separation was accomplished using a Waters ACQUITY UPLC HSS T3 1.8 μm; 2.1 × 50 mm column with a Waters ACQUITY UPLC HSS T3 1.8 μm VanGuard Pre-column; 2.1 × 5 mm, using gradient elution with ammonium acetate 20 mM (pH 5) and acetonitrile as mobile phase at a flow rate of 0.8 ml/min. Mass spectrometric analysis of the acetate adduct ions was carried out using electrospray with negative ionization and SRM mode. The assay was validated according to FDA and EMA guidelines, including selectivity, linearity, accuracy and precision, dilution integrity, stability and recovery. With a sample volume of 200 µl, linear ranges of 10-5000 µg/L, 1-500 µg/L and 2-1000 µg/L for canagliflozin, dapagliflozin and empagliflozin respectively, were achieved. The assay was successfully applied in two pharmacokinetic studies with dapagliflozin and empagliflozin. In conclusion, we developed and validated a simple, fast and robust LC-MS/MS method for the simultaneous quantification of canagliflozin, dapagliflozin and empagliflozin, that allows rapid analysis of large numbers of samples and can be used for both pharmacokinetic studies and biomedical analysis of canagliflozin, dapagliflozin and empagliflozin.