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バイアビリティPCRは、非眼球表面がトラコーマにおけるクラミジア・トラコマチス感染の伝播に寄与する可能性を示している
Viability PCR shows that non-ocular surfaces could contribute to transmission of Chlamydia trachomatis infection in trachoma.
PMID: 32667914 DOI: 10.1371/journal.pntd.0008449.
抄録
背景:
眼球以外の部位にクラミジア・トラコマティス（Ct）のDNAが存在することから、これらの部位がトラコーマにおけるCtの感染経路である可能性が示唆される。しかし、qPCRでは生菌由来のDNAと非生菌由来のDNAを区別することはできない。ここでは、プロポディウムモノアジドをベースとした生存性PCRを用いて、実験室管理下でCtが非眼球部位でどのくらいの期間生存しているかを調査した。
BACKGROUND: The presence of Chlamydia trachomatis (Ct) DNA at non-ocular sites suggests that these sites may represent plausible routes of Ct transmission in trachoma. However, qPCR cannot discriminate between DNA from viable and non-viable bacteria. Here we use a propodium monoazide based viability PCR to investigate how long Ct remains viable at non-ocular sites under laboratory-controlled conditions.
方法:
培養したCt株（A2497株）を最終濃度1000、100、10および1 omcBコピー/μLに希釈し、プラスチック、布帛マット、綿布および豚皮に塗布した。次に、各表面からスワブを全身的に採取し、qPCRを用いてCt DNAの存在を検査した。Ct DNAが回収された場合、Ctの生存率は、同じ表面タイプの複数の領域を同じ最終濃度でスパイクすることにより、経時的に評価した。スクラブは、スパイク後０、２、４、６、８、２４時間後に各表面から採取した。各タイムポイントでの Ct の生存率を決定するために、生存率 PCR を使用した。
METHODS: Cultured Ct stocks (strain A2497) were diluted to final concentrations of 1000, 100, 10 and 1 omcB copies/μL and applied to plastic, woven mat, cotton cloth and pig skin. Swabs were then systemically collected from each surface and tested for the presence Ct DNA using qPCR. If Ct DNA was recovered, Ct viability was assessed over time by spiking multiple areas of the same surface type with the same final concentrations. Swabs were collected from each surface at 0, 2, 4, 6, 8 and 24 hours after spiking. Viability PCR was used to determine Ct viability at each timepoint.
結果:
我々は、織られたマットを除くすべての表面でCtのDNAを検出することができました。プラスチック、豚皮、綿布に適用したすべての濃度で、総Ct DNAは24時間にわたって検出可能で安定していた。生存可能なCtの量は時間の経過とともに減少した。プラスチックと皮膚の表面については、100または1000omcBコピー/μLの濃度を適用したものだけが24時間後も検出可能な生菌量を有していた。綿布では、より急速な減少が見られ、1000omcBコピー/μLの濃度を適用したものだけが24時間後に検出可能な生菌DNAを保持していた。
RESULTS: We were able to detect Ct DNA on all surfaces except the woven mat. Total Ct DNA remained detectable and stable over 24 hours for all concentrations applied to plastic, pig skin and cotton cloth. The amount of viable Ct decreased over time. For plastic and skin surfaces, only those where concentrations of 100 or 1000 omcB copies/μL were applied still had viable loads detectable after 24 hours. Cotton cloth showed a more rapid decrease and only those where concentrations of 1000 omcB copies/μL were applied still had viable DNA detectable after 24 hours.
結論:
プラスチック、綿布、皮膚は、細菌の貯蔵庫が沈着し、後に収集され、以前に感染していない目に機械的に移動する場所として作用することで、トラコーマの原因となるCt株の感染に寄与する可能性があります。
CONCLUSION: Plastic, cotton cloth and skin may contribute to transmission of the Ct strains that cause trachoma, by acting as sites where reservoirs of bacteria are deposited and later collected and transferred mechanically into previously uninfected eyes.