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実験的に感染したペキンとムスコビのアヒルの子ガモにおけるアヒルA型肝炎ウイルス-1株の比較病原性
Comparative Pathogenicity of Duck Hepatitis A Virus-1 Isolates in Experimentally Infected Pekin and Muscovy Ducklings.
PMID: 32671102 PMCID: PMC7326108. DOI: 10.3389/fvets.2020.00234.
抄録
アヒル肝炎ウイルス（DHV）は、1960年代以降、エジプトでは常にアヒルの養殖を脅かす脅威の一つと考えられてきた。本研究では、2012年から2017年の間に、ベヒーラ県、アレクサンドリア県、ガルビア県、カフルエルシェイク県、ギザ県の商業的なペキン、ムラード（雑種）、ムスコヴィのアヒル農場とバックヤードからDHVの疑いのあるサンプル（＝30）を採取した。罹患した生後3～21日齢のアヒルの子ガモは、高い死亡率と神経症状の病歴を示した。サンプルは、5'UTR領域とVP1遺伝子を標的としたRT-PCRでスクリーニングした。PCRで確認されたサンプル（＝7）は、9日齢の特異的病原体を持たない胚化鶏卵にアラントルート接種して単離した。胚は発育不全、皮下出血、肝臓壊死性緑黄色病巣を示した。アヒルA型肝炎ウイルス-1（DHAV-1）単離株を、他の圃場株およびワクチン株と比較して遺伝学的に解析した。VP1遺伝子の完全長配列の系統解析の結果、得られたDHAV-1フィールド分離株は、同時期に分離された他のエジプト株と並んで遺伝学的グループ4に分類された（95.9～99.72％の類似度）。VP1のカルボキシル末端のアミノ酸置換（I180T, G184E, D193N, M213I）が2株で確認された。また、3株のDHAV-1ではI189に欠失変異が検出された。さらに，2つのアミノ酸残基E205およびN235は，分離株と他の病原性DHAV-1株との間で共通していた．VP1のC末端に検出された点変異に基づいて，北京由来のDHAV-1株を2株選択して比較病原性試験を行った．これらの分離株の病原性は，臨床症状，死亡率，病理学的・顕微鏡的病変を調べて評価した．その結果，PekinとMuscovyに感染したアヒルの臨床症状は類似しており，しゃがみ込み，側臥位，痙攣性蹴りなどの症状が見られた．肝臓の病理学的変化は、ペキンガモに比べてムスコビガモの方が軽度であった。組織病理学的所見は、両種で検出された総病変を支持するものであった。結論として、これらのデータはエジプト産DHAV-1株の遺伝的多様性と病理型に関する最新の情報を提供するものである。私たちの知る限りでは、これはエジプトおよび中東地域のペキンおよびムスコビー鴨の最近のDHAV-1株の比較病原性についての最初の報告である。
Duck hepatitis virus (DHV) has always been considered one of the threats endangering duck farming in Egypt since the 1960s. In the current study, suspected DHV samples ( = 30) were obtained from commercial Pekin, Mulard (hybrid), and Muscovy duck farms and backyards in Beheira, Alexandria, Gharbia, Kafr El-Sheikh, and Giza provinces between 2012 and 2017. Diseased 3-21-day-old ducklings showed a clinical history of high mortality rates and nervous signs. Samples were screened by RT-PCR targeting the 5'UTR region and VP1 gene. The PCR-confirmed samples ( = 7) were isolated allantoic route inoculation onto 9-day-old specific-pathogen-free embryonated chicken eggs. Embryos showed stunting, subcutaneous hemorrhages, and liver necrotic greenish-yellow foci. Duck hepatitis A virus-1 (DHAV-1) isolates were genetically analyzed in comparison to other field and vaccine strains. Phylogenetic analyses of the full-length VP1 gene sequences revealed that the obtained DHAV-1 field isolates clustered into genetic group 4 alongside other Egyptian strains isolated during the same period (95.9-99.72% similarity). Amino acid substitutions in the carboxyl-terminal of VP1 (I180T, G184E, D193N, and M213I) were identified in two strains. Also, deletion mutation at I189 was detected in three DHAV-1 strains. Additionally, the two amino acid residues E205 and N235 were common among the isolated strains and other virulent DHAV-1 strains. Two DHAV-1 isolates originated from Pekin source were selected for conducting the comparative pathogenicity testing based on detected point mutations at C-terminus of VP1. We evaluated the pathogenicity of these isolates by investigating clinical signs, mortality rates, and gross pathological and microscopic lesions. The study revealed that experimentally infected Pekin and Muscovy ducklings showed similar clinical signs including squatting down, lateral recumbency, and spasmodic kicking. Muscovy showed milder pathological changes in the liver compared to Pekin ducklings. Histopathological findings supported the gross pathological lesions detected in both breeds. In conclusion, these data provide updated information on the genetic diversity and pathotyping of Egyptian DHAV-1 strains. To the best of our knowledge, this is the first report of comparative pathogenicity of recent DHAV-1 strains in Pekin and Muscovy ducklings in Egypt and the Middle East region.
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