日本語AIでPubMedを検索
BE4maxとAncBE4maxはゼブラフィッシュの生殖細胞におけるC:GからT:Aへの塩基対の変換に効率的である
BE4max and AncBE4max Are Efficient in Germline Conversion of C:G to T:A Base Pairs in Zebrafish.
PMID: 32674364 DOI: 10.3390/cells9071690.
抄録
CRISPR/Cas9によるゲノム編集の使いやすさと堅牢性は、遺伝子ノックアウトゼブラフィッシュの疾患モデル化に成功している。しかし、ヒトの病気の原因となる突然変異の約60％を占める1ヌクレオチド置換を作成するために、ゼブラフィッシュのゲノムを正確に編集することは、依然として課題となっている。最近開発された塩基編集ヌクレアーゼは、CRISPR/Cas9を介したホモロジー依存性修復に代わる優れた方法で、点突然変異を持つゼブラフィッシュを生成することができます。BE4maxとAncBE4maxと呼ばれる新しいシトシン塩基編集ヌクレアーゼは、哺乳類細胞では塩基編集効率が改善されていることが示されたが、ゼブラフィッシュでは評価されていなかった。そこで本研究では、ゼブラフィッシュの体細胞および生殖細胞の解析を行い、高活性 sgRNA to および遺伝子を用いて、BE4max および AncBE4max の C:G から T:A への塩基対変換効率を評価した。我々のデータでは、これらの改良されたBE4maxプラスミドセットは、以前に報告されたBE3プラスミドやTarget-AIDプラスミドと比較して、ゼブラフィッシュにおいて同様の効率でインデルなしで所望の塩基置換が可能であることが示された。我々のデータはまた、AncBE4maxが不正確な編集やバイスタンダー編集をより少なく生成することを示しており、ゼブラフィッシュでの使用のためにその構成要素のコドンの最適化によってさらに改良されることを示唆している。
The ease of use and robustness of genome editing by CRISPR/Cas9 has led to successful use of gene knockout zebrafish for disease modeling. However, it still remains a challenge to precisely edit the zebrafish genome to create single-nucleotide substitutions, which account for ~60% of human disease-causing mutations. Recently developed base editing nucleases provide an excellent alternate to CRISPR/Cas9-mediated homology dependent repair for generation of zebrafish with point mutations. A new set of cytosine base editors, termed BE4max and AncBE4max, demonstrated improved base editing efficiency in mammalian cells but have not been evaluated in zebrafish. Therefore, we undertook this study to evaluate their efficiency in converting C:G to T:A base pairs in zebrafish by somatic and germline analysis using highly active sgRNAs to and genes. Our data demonstrated that these improved BE4max set of plasmids provide desired base substitutions at similar efficiency and without any indels compared to the previously reported BE3 and Target-AID plasmids in zebrafish. Our data also showed that AncBE4max produces fewer incorrect and bystander edits, suggesting that it can be further improved by codon optimization of its components for use in zebrafish.