免疫反応性マウス抗セラの生産のための組換え植物ラブドウイルス糖タンパク質の合理的な設計と発現

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Protein Expr. Purif..2020 Jul;:105691. S1046-5928(20)30282-5. doi: 10.1016/j.pep.2020.105691.Epub 2020-07-14.

免疫反応性マウス抗セラの生産のための組換え植物ラブドウイルス糖タンパク質の合理的な設計と発現

Rational design and expression of a recombinant plant rhabdovirus glycoprotein for production of immunoreactive murine anti-sera.

A Ibrahim
Reljic Rajko
M W Drake Pascal
K-C Ma Julian

PMID: 32679171 DOI: 10.1016/j.pep.2020.105691.

抄録

レタス壊死性黄色ウイルス（LNYV）は、1型の膜貫通型糖タンパク質を持つ植物性ラブドウイルスである。ここでは、この糖タンパク質に対するマウス抗セラの生成について述べる。SignalP4.1とcamSolサーバーを用いて、シグナルペプチドの切断およびタンパク質の溶解度を予測するために、rLGeと呼ばれる組換え糖タンパク質の合理的な設計、発現および精製が行われた。哺乳類細胞での発現を得るために、LNYV糖タンパク質ネイティブのシグナルペプチドを狂犬病ウイルス糖タンパク質で置換した。さらに、分子全体を発現させるのではなく、2つのアフィニティータグにLNYV糖タンパク質のエクトドメインを融合させ、タンパク質凝集のリスクを最小限に抑えつつ、検出と精製を容易にした。収穫された抗セラは、LNYVに感染した植物葉組織のウエスタンブロッティングによって確認されたように、免疫反応性であり、天然に存在する糖タンパク質に特異的であった。

Lettuce necrotic yellows virus (LNYV) is a plant rhabdovirus which has a type-1 transmembrane glycoprotein. Here, we describe the generation of murine anti-sera to the glycoprotein. Rational design, expression, and purification of recombinant glycoprotein, termed rLGe, was undertaken using SignalP4.1 and camSol servers to predict signal peptide cleavage and protein solubility. In order to successfully obtain expression in mammalian cells, LNYV glycoprotein native signal peptide was substituted with that of Rabies virus glycoprotein. In addition, rather than expression of the entire molecule, rLGe consisted of the LNYV glycoprotein ectodomain fused to two affinity tags to minimize the risk of protein aggregation, while facilitating detection and purification. rLGe was transiently expressed in mammalian cell culture, purified using affinity column chromatography, and used to immunize mice. Harvested anti-sera were immunoreactive and specific to the naturally occurring glycoprotein as confirmed by western blotting of plant leaf tissue infected with LNYV.