ラット血漿中のタモキシフェンとスルホラファンの同時測定のためのハイスループット生体分析UPLC-MS/MS法の開発と検証。経口薬物動態試験への応用

Development and validation of a high throughput bioanalytical UPLC-MS/MS method for simultaneous determination of tamoxifen and sulphoraphane in rat plasma: Application to an oral pharmacokinetic study.

• Bharti Mangla
• Ozair Alam
• Rehan Abdur Rub
• Muzaffar Iqbal
• Archu Singh
• Kuldeep Singh Patel
• Kanchan Kohli

抄録

タモキシフェン（TAM）は、エストロゲン陽性受容体（ER+）乳がんの治療のために食品医薬品局（FDA）によって承認された薬剤の選択肢の一つです。天然の植物抗酸化物質であるスルホラファン（SFN）は、エストロゲン陽性乳がん受容体にも作用します。そのため、TAMとSFNを併用することで、薬剤の毒性を最小限に抑え、両薬剤の相乗的な抗がん作用により治療効果を高めることができるため好ましいと考えられています。本研究では、ラット血漿中のタモキシフェンとスルホラファンの同時定量のために、プロプラノ ロールを内部標準物質（IS）として用いたシンプルで高感度、高精度、高選択性の UPLC-MS/MS 法を開発した。クロマトグラフィー分離は、溶媒A（0.1%ギ酸、アセトニトリル）と溶媒B（0.1%ギ酸、水）からなるアイソクラティック移動相（80:20、v/v）を用いた逆相Acquity UPLC BEH Cカラム（50mm×2.1mm、内径1.7μm）を用いて、0.4mL/minの流量で行った。分析物の検出および定量は、Waters Zspray Xevo TQD上で、ポジティブエレクトロスプレーイオン化モードで操作された選択イオンモニタリングを使用して行った。遷移は、タモキシフェンでは m/z=372.0 [M+H] → 71.92、スルホラファンでは m/z=177.9 [M+H] → 113.9、プロプラノロールでは m/z=260.3 [M+H] → 116.1 であった。この方法は、タモキシフェンでは8-500ng/mL (r=0.9996)、スルホラファンでは30-2000ng/mL (r=0.9998)の濃度範囲で直線的であり、マトリックスの影響はほとんどなく、品質管理(QC)サンプルでは高い抽出回収率を示しました。バッチ内及びバッチ間の精度は許容範囲内であり、両成分は短期、長期及び凍結融解安定性試験においても安定であることが確認された。また、本法は雌のWistarラットを用いた経口薬物動態試験において、TAMとSFNの同時測定に適用することに成功した。このUPLC-MS/MS法は、今後の薬物動態学的相互作用、治療薬モニタリング、新規製剤の薬物動態学的特性評価のための貴重なツールとなる可能性がある。

Tamoxifen (TAM) is the choice of a drug approved by the Food and Drug Administration (FDA) for the treatment of estrogen-positive receptor (ER+) breast cancer. Sulphoraphane (SFN), a natural plant antioxidant compound, also acts on estrogen-positive breast cancer receptor. Thus, a combination of TAM with SFN is preferred as it helps to minimize the drug-related toxicity and increases the therapeutic efficacy by providing synergistic anticancer effects of both drugs. In the present study, a new simple, sensitive, precise, and selective UPLC-MS/MS method was developed for the simultaneous quantification of tamoxifen and sulphoraphane using propranolol as an internal standard (IS) in rat plasma. Chromatographic separation was achieved on reverse phase Acquity UPLC BEH C column (50 mm × 2.1 mm, i.d., 1.7 μm) with an isocratic mobile phase composed of solvent A (0.1% formic acid in acetonitrile) and B (0.1% formic acid in water) (80:20, v/v) at a flow-rate of 0.4 mL/min. The detection and quantification of analytes was performed on Waters Zspray Xevo TQD using selected-ion monitoring operated under a positive electrospray ionization mode. The transitions were m/z = 372.0 [M+H] → 71.92 for tamoxifen, m/z = 177.9 [M+H] → 113.9 for sulphoraphane and m/z = 260.3 [M+H] → 116.1 for propranolol. The method was linear over the concentration range of 8-500 ng/mL (r = 0.9996) for tamoxifen, 30-2000 ng/mL (r = 0.9998) for sulphoraphane with insignificant matrix effect and high extraction recovery on spiked quality control (QC) samples. The intra- and inter-batch precisions and accuracy were within the acceptable limits, and both the analytes were found to be stable throughout the short term, long term and freeze thaw stability studies. The validated method was successfully applied for the simultaneous estimation of TAM and SFN in an oral pharmacokinetic study in female Wistar rats. This developed UPLC-MS/MS method could be a valuable tool for future pharmacokinetic interaction, therapeutic drug monitoring and pharmacokinetic characterization of novel formulations.

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