ヒト羊膜上皮細胞に対する低温保存の効果

Effects of Cryogenic Storage on Human Amnion Epithelial Cells.

• Raghuraman C Srinivasan
• Stephen C Strom
• Roberto Gramignoli

抄録

周産期幹細胞と羊膜から単離された上皮細胞は、特に、細胞治療のための多能性細胞の有望な供給源として、過去10年間で関心を集めてきた。ヒト羊膜上皮細胞（ｈＡＥＣ）は、前臨床研究において、メープルシロップ尿症や肝臓の線維化などの単為性肝疾患の治療に使用されてきた。ほとんどの研究では、hAECの異種移植は免疫抑制を行わずに行われており、これはhAECの忍容性を反映したものである。多くの細胞型にとって、凍結保存の成功は、容易に入手可能な市販品を提供するために非常に重要である。この研究では、14の異なるドナーからの成熟期のヒト胎盤からhAECを分離し、上皮細胞の保存のために一般的に採用されているプロトコルと試薬を使用して凍結保存した。細胞は、上皮細胞、間葉系細胞、内皮細胞、または造血細胞に特徴的な表面マーカーのためにプロファイリングされ、生存、回復、および均質性の観点から分析された。凍結保存前後の上皮細胞マーカーを有する細胞の割合には、有意差は認められなかった。間質細胞と造血細胞の相対的な割合は、凍結保存後のhAEC調製物において有意に減少した。幹細胞および免疫調節分子の発現は最終産物で確認された。多能性細胞は成熟期の胎盤から容易に入手可能であるため、この新しい細胞源は、肝臓やその他の疾患に対する細胞治療を受けられる患者数を大幅に増加させる可能性がある。

Perinatal stem cells and epithelial cells isolated from full term amnion membrane, in particular, have attracted interest over the last decade, as a promising source of multipotent cells for cellular therapies. Human amnion epithelial cells (hAEC) have been used to treat monogenetic liver disease such as maple syrup urine disease or fibrosis of the liver in preclinical studies. In most studies xeno-transplants of hAEC were conducted without providing immunosuppression to recipients, reflecting the tolerogenic properties of hAEC. For many cell types, successful cryopreservation is critical for providing a readily available, off-the-shelf product. In this study, hAEC were isolated from full-term human placenta from 14 different donors, cryopreserved using a protocol and reagents commonly adopted for epithelial cell preservation. The cells were analyzed in terms of survival, recovery, and homogeneity, profiled for surface markers characteristic of epithelial, mesenchymal, endothelial, or hematopoietic cells. There were no significant differences observed in the percentage of cells with epithelial cell markers before and after cryopreservation. The relative proportion of stromal and hematopoietic cells was significantly reduced in hAEC preparations after cryopreservation. The expression of stem cell and immunomodulatory molecules were confirmed in the final product. Since multipotent cells are readily available from full-term placenta, this novel cell source might significantly increase the number of patients eligible to receive cellular therapies for liver and other diseases.