Hsa_circ_0128846 は hsa-miR-1184 をスポンギングして AJUBA を放出し、Hippo/YAP シグナルを不活性化することで大腸がんの腫瘍形成を促進しています

Hsa_circ_0128846 promotes tumorigenesis of colorectal cancer by sponging hsa-miR-1184 and releasing AJUBA and inactivating Hippo/YAP signalling.

• Xu Wang
• Yujia Chen
• Wei Liu
• Tao Liu
• Di Sun

抄録

Hsa_circ_0128846は、我々のバイオインフォマティクス解析において、最も有意にアップレギュレーションされたcircRNAであることが判明した。しかし、大腸がんにおける hsa_circ_0128846 の役割については、これまで検討されていませんでした。そこで我々は、大腸がんにおける hsa_circ_0128846 の下流miR-1184 をスポンギングすることで、大腸がんにおける hsa_circ_0128846 の影響とそのメカニズムを探ることを目的としている。大腸癌患者40名の腫瘍組織を採取し、必要に応じてqRT-PCRとウエスタンブロットを用いて、hsa_circ_0128846、miR-1184、AJUBAの発現を解析した。次に、安定的にトランスフェクトした SW480 細胞と HCT116 細胞を構築し、hsa_circ_0128846, miR-1184, AJUBA が大腸癌細胞の表現型に及ぼす影響を調べた。信頼性の高い結果を得るために、RNA 免疫沈降アッセイ、フローサイトメトリー、EdU 組込みアッセイ、創傷治癒遊走アッセイ、トランスウェル浸潤アッセイ、ヌードマウスキセノグラフトアッセイのライブイメージングを含む多くの実験を行った。大腸癌における hsa_circ_0128846, miR-1184, AJUBA mRNA の結合関係は、報告されている遺伝子アッセイにより検証された。大腸癌組織では、circ_0128846 と AJUBA は共に有意に上昇し、miR-1184 は健常組織と比較して有意に低下していた。一方、hsa_circ_0128846はmiR-1184を吸収し、in vivoではCRCの進行を促進し、in vitroではSW480およびHCT116細胞の表現型を促進することができる。miR-1184の下流標的であるAJUBAのノックダウンは、Hippo/YAPシグナル伝達経路タンパク質MST1、LATS1、YAPのリン酸化を増強することで、CRC細胞におけるmiR-1184の効果を逆転させた。今回の研究により、hsa_circ_0128846はmiR-1184の発現を低下させ、AJUBAの発現を増加させ、Hippo/YAPシグナルを不活性化させることで、CRCの発症に寄与していることが明らかになりました。

Hsa_circ_0128846 was found to be the most significantly up-regulated circRNA in our bioinformatics analysis. However, the role of hsa_circ_0128846 in colorectal cancer has not been explored. We thus aim to explore the influence and mechanism of hsa_circ_0128846 in colorectal cancer by sponging its downstream miRNA target miR-1184. We collected 40 colorectal cancer patients' tumour tissues to analyse the expression of hsa_circ_0128846, miR-1184 and AJUBA using qRT-PCR and Western blot where needed. Then, we constructed stably transfected SW480 and HCT116 cells to study the influence of hsa_circ_0128846, miR-1184 and AJUBA on colorectal cancer cell phenotypes. To obtain reliable results, a plethora of experiments including RNA immunoprecipitation assay, flow cytometry, EdU incorporation assay, wound healing migration assay, transwell invasion assay and live imaging of nude mice xenograft assay were performed. The binding relationship between hsa_circ_0128846, miR-1184 and AJUBA mRNA in colorectal cancer was validated by reported gene assay. In colorectal cancer tissues, circ_0128846 and AJUBA were both significantly up-regulated, while miR-1184 was significantly down-regulated compared with healthy tissues. Meanwhile, hsa_circ_0128846 can absorb miR-1184 to promote the progression of CRC in vivo and SW480 and HCT116 cell phenotypes in vitro. The knockdown of AJUBA, a downstream target of miR-1184, reversed the effect of miR-1184 in CRC cells via enhancing the phosphorylation of the Hippo/YAP signalling pathway proteins MST1, LATS1 and YAP. This study revealed that hsa_circ_0128846 contributed to the development of CRC by decreasing the expression of miR-1184, thereby increasing AJUBA expression and inactivating Hippo/YAP signalling.

© 2020 The Authors. Journal of Cellular and Molecular Medicine published by Foundation for Cellular and Molecular Medicine and John Wiley & Sons Ltd.