hsa_circ_0007580 のダウンレギュレーションは、miR-545-3p のスポンギングを抑制し、非小細胞肺癌の発癌を抑制する

Downregulation of hsa_circ_0007580 inhibits non-small cell lung cancer tumorigenesis by reducing miR-545-3p sponging.

• Shuifang Chen
• Shan Lu
• Yinan Yao
• Junjun Chen
• Guangdie Yang
• Lingfang Tu
• Zeying Zhang
• Jianli Zhang
• Lina Chen

抄録

非小細胞肺がん（NSCLC）は悪性度の高い腫瘍である。多くのcircular RNA（circRNA）がNSCLCの進行を制御していることが報告されています。NSCLCの治療標的となる可能性を明らかにするために、NSCLC組織と隣接する正常組織との間で異なる発現を示すcircRNAのバイオインフォマティクス解析を行った。Hsa_circ_0007580 は NSCLC 腫瘍組織でアップレギュレーションされており、その宿主遺伝子（プロテインキナーゼ Ca）の発現は全生存期間と負の相関を示した。ショートヘアピン RNA を用いて NSCLC 細胞の hsa_circ_0007580 をノックダウンし、遺伝子レベルとタンパク質レベルをそれぞれ qRT-PCR とウェスタンブロッティングで測定した。NSCLC 細胞の増殖、遊走、アポトーシスはそれぞれ CCK-8 アッセイ、Ki-67 染色、Transwell アッセイ、フローサイトメトリーで評価した。hsa_circ_0007580をノックダウンすると、NSCLC細胞の増殖と浸潤が抑制され、アポトーシスが誘導された。デュアルルシフェラーゼレポーターアッセイにより、miR-545-3pはhsa_circ_0007580に結合し（hsa_circ_0007580がmiR-545-3pをスポンジすることを示唆）、プロテインキナーゼCaに結合し（miR-545-3pがこの遺伝子を直接阻害することを示唆）、miR-545-3pはhsa_circ_0007580をノックダウンした細胞の増殖と浸潤を抑制した。異種移植腫瘍モデルでは、hsa_circ_0007580 のダウンレギュレーションは、p38/ミトゲン活性化プロテインキナーゼシグナル伝達を不活性化することで、NSCLC の腫瘍形成を抑制した。このように、hsa_circ_0007580 をサイレンシングすることで、NSCLC の進行を有意に抑制し、この circRNA が NSCLC の新規治療ターゲットとなる可能性が示唆された。

Non-small cell lung cancer (NSCLC) is a highly malignant tumor. Many circular RNAs (circRNAs) are reportedly in regulating the progression of NSCLC. To identify potential therapeutic targets for NSCLC, we conducted a bioinformatics analysis of circRNAs differentially expressed between NSCLC tissues and adjacent normal tissues. Hsa_circ_0007580 was upregulated in NSCLC tumor tissues, and the expression of its host gene (protein kinase Ca) correlated negatively with overall survival. Short-hairpin RNAs were used to knock down hsa_circ_0007580 in NSCLC cells, and gene and protein levels were measured with qRT-PCR and Western blotting, respectively. NSCLC cell proliferation, migration and apoptosis were evaluated with CCK-8 assays, Ki-67 staining, Transwell assays and flow cytometry, respectively. Knocking down hsa_circ_0007580 inhibited proliferation and invasion by NSCLC cells and induced their apoptosis. Dual luciferase reporter assays indicated that miR-545-3p can bind to hsa_circ_0007580 (suggesting that hsa_circ_0007580 sponges miR-545-3p) and to protein kinase Ca (suggesting that miR-545-3p directly inhibits this gene). In a xenograft tumor model, downregulating hsa_circ_0007580 inhibited NSCLC tumorigenesis by inactivating p38/mitogen-activated protein kinase signaling. Thus, silencing hsa_circ_0007580 notably inhibited NSCLC progression and , suggesting this circRNA could be a novel treatment target for NSCLC.