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腎細胞癌仮性カプセルの多光子顕微鏡的研究。腫瘍の核出射への示唆
Multiphoton Microscopic Study of the Renal Cell Carcinoma Pseudocapsule: Implications for Tumour Enucleation.
PMID: 32681916 DOI: 10.1016/j.urology.2020.06.064.
抄録
目的:
腎細胞がん仮性カプセルのコラーゲンを特徴づけ、定量化するための新しいイメージング技術として多光子顕微鏡法を利用して、コラーゲン特性の腫瘍内および腫瘍間のばらつきを評価することを目的としています。MPMは、第二高調波発生法と二光子励起蛍光法を組み合わせて、細胞外マトリックスの構造を画像化します。
OBJECTIVE: To utilise Multiphoton Microscopy as a novel imaging technique to characterize and quantify collagen at the Renal Cell Carcinoma Pseudocapsule, to assess for both intra-tumoral and inter-tumoral variation of collagen characteristics. MPM combines Second Harmonic Generation and Two Photon Excitation Fluorescence to image extracellular matrix architecture.
方法:
20個の部分腎摘出標本組織を回収し、5ミクロンの切片に切断し、スライドにマウントし、脱パラフィン化した。疑似カプセルは、選択された関心領域で2Xおよび20Xの対物レンズで画像化された。対応する臨床情報を検索した。偽カプセルの厚さを決定した。測定されたコラーゲンパラメータは、コラーゲン面積比による定量化、およびコラーゲン繊維密度およびコラーゲン網状化指数による定性測定が含まれています。
METHODS: 20 partial nephrectomy specimen tissues were retrieved, cut into 5-micron sections, mounted on slides and deparaffinized. The pseudocapsules were imaged with 2X and 20X objective at selected Regions of Interest. Corresponding clinical information was retrieved. Pseudocapsule thickness was determined. Collagen parameters measured included quantification by the Collagen Area Ratio, and qualitative measurements by the Collagen Fiber Density and Collagen Reticulation Index.
結果:
腫瘍、PC、正常腎実質の境界は、染色を必要とせずに多光子顕微鏡によって区別された。擬似カプセルの最も厚い部分では、最も薄い部分に比べてコラーゲンの含有量と密度が定量的に高くなっていました。コラーゲン面積比の中央値は、PCの最も厚い部分が最も薄い部分に比べて高かった（p=0.01）。透明細胞RCC標本は、非透明細胞RCC標本と比較して、最も厚い部分と最も薄い部分の両方で一貫して高いコラーゲン繊維密度を有していた（p=0.02）。
RESULTS: The boundaries between tumor, PC and normal renal parenchyma were distinguished by Multiphoton Microscopy without need for staining. In the thickest areas of the pseudocapsule, collagen content and density were quantitatively higher compared to the thinnest areas. Median Collagen Area Ratio was higher in the thickest compared to the thinnest areas of the PC (p=0.01). Clear Cell RCC specimens had a consistently higher Collagen Fiber Density in both the thickest and thinnest areas compared to non-Clear Cell RCC specimens (p=0.02).
結論:
多光子顕微鏡を用いて、蛍光標識なしで疑似カプセルのコラーゲン特性を定量化する能力を実証した。腎細胞癌の腫瘍摘出は、擬カプセルに沿った腫瘍摘出であるため、腫瘍学的な安全性に関しては議論の余地がある。完全で無傷の疑似カプセルであっても、疑似カプセルは均質な構造ではなく、その厚さやコラーゲンの特性は、腫瘍内でも腫瘍間でも異なる。
CONCLUSIONS: We demonstrated the ability of Multiphoton Microscopy to quantify collagen characteristics of pseudocapsules without fluorescent labelling. Tumor enucleation for Renal Cell Carcinoma along its Pseudocapsule remains debatable with regards to oncological safety. Even with a complete and intact pseudocapsule, the pseudocapsule is not a homogenous structure, and varies in its thickness and its collagen characteristics within, and between, tumours.
Copyright © 2020. Published by Elsevier Inc.