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ニワトリケモカインCCモチーフリガンド4に対する新規マウスモノクローナル抗体の開発と特性評価
Development and characterization of novel mouse monoclonal antibodies against chicken chemokine CC motif ligand 4.
PMID: 32682170 DOI: 10.1016/j.vetimm.2020.110091.
抄録
ケモカイン（C-Cモチーフ）リガンド（CCL）4は、保存されたシステイン残基が連続的に配置されていることで定義されるCCケモカインサブファミリーのメンバーです。CCL4は、細胞表面上のGタンパク質共役型受容体と結合することで、走化性、腫瘍形成、恒常性、胸腺形成などの多様な生物学的プロセスを仲介します。哺乳類CCL4の生理的役割は20年以上前に解明されているが、ニワトリCCL4（chCCL4）の生物学的活性に関する情報は限られている。本研究では、鶏CCL4の免疫学的特性をよりよく理解するために、鶏CCL4に対するマウスモノクローナル抗体（mAbs）を開発し、その特徴を明らかにしました。400以上のクローンをスクリーニングした結果、chCCL4を検出する2つのmAb（1A12と15D9）をウエスタンブロット法とchCCL4特異的抗原捕捉酵素免疫吸着法を用いて同定し、その中和活性をchCCL4誘導性末梢血単核球走化性試験で検証した。さらに、1A12および15D9 mAbsを用いて、免疫細胞化学およびフローサイトメトリーによる様々なニワトリ細胞におけるchCCL4の細胞内発現を確認した。以上の結果から、1A12 mAbsおよび15D9 mAbsはニワトリCCL4を特異的に検出することが明らかになり、鳥類免疫学の基礎研究および応用研究に有用な免疫試薬となることが期待されます。
Chemokine (C-C motif) ligand (CCL) 4 is a CC chemokine subfamily member defined by the sequential positioning of conserved cysteine residues. Upon the binding of G-protein-coupled receptors on the cell surface, CCL4 mediates a diverse set of biological processes including chemotaxis, tumorigenesis, homeostasis and thymopoiesis. Although the physiological roles of mammalian CCL4s were elucidated >20 years ago, there is limited information on the biological activities of chicken CCL4 (chCCL4). In the present study, we developed and characterized mouse monoclonal antibodies (mAbs) against chCCL4 to characterize better the immunological properties of chCCL4. Out of initial screening of >400 clones, two mAbs detecting chCCL4, 1A12 and 15D9, were identified and characterized using western blotting and chCCL4-specific antigen-capture enzyme-linked immunosorbent assay, and their neutralizing activity was validated by chCCL4-induced peripheral blood mononuclear cell chemotaxis assay. Furthermore, the intracellular expression of chCCL4 in various chicken cells by immunocytochemistry and flow cytometry was confirmed using 1A12 and 15D9 mAbs. These results collectively indicate that 1A12 and 15D9 mAbs specifically detect chicken CCL4 and they will be valuable immune reagents for basic and applied studies in avian immunology.
Copyright © 2020. Published by Elsevier B.V.