ポリドナウイルスインネキシン同族体の細胞内ダイナミクス

Intracellular dynamics of polydnavirus innexin homologues.

• D K Hasegawa
• P Zhang
• M W Turnbull

抄録

イクノウィルス（Ichnovirus）は、多くの場合マルチジーンファミリーに属する多数の遺伝子をコードしている。寄生した鱗翅目の幼虫に発現するイクノウイルスビネキシン遺伝子ファミリーは、昆虫のギャップジャンクションの構造的構成要素であるインネキシンのホモログをコードしている。ここでは、Campoletis sonorensis Ichnovirus (CsIV) Vinnexins の細胞内挙動を、単独および宿主 Innexin のオルソログである Innexin2 (Inx2) との組み合わせで調べた。QRT-PCRにより、CsIVビネキシンの転写はInx2と同時に起こることが確認され、ビネキシンとInx2タンパク質の共発現が示唆された。共焦点顕微鏡により、エピトープタグ付きVinnexinG（VnxG）とVinnexinQ2（VnxQ2）はSpodoptera frugiperda Inx2（Sf-Inx2）と同様の細胞内局在を示すことが明らかになった。表面ビオチン化アッセイでは、3つのタンパク質はすべて細胞表面に局在することが確認されており、シトカラシンBとノコダゾールは、局在化のためにアクチンと微小管細胞骨格ネットワークに依存していることが確認されました。また、VinnexinsがSf-Inx2の分布にVinnexin特異的な方法で影響を与えている可能性が示唆されました。これらの知見は、ヴィネクシンが、ギャップジャンクション細胞間チャネル通信を変化させることにより、タンパク質特異的な方法で宿主細胞の生理機能を混乱させる可能性があること、また、多細胞接合部の特性に影響を与えることにより間接的に宿主細胞の生理機能を混乱させる可能性があることを支持するものである。この論文は著作権により保護されています。無断転載を禁じます。

Polydnaviruses associated with ichneumonid parasitoid wasps (Ichnoviruses) encode large numbers of genes, often in multigene families. The Ichnovirus Vinnexin gene family, which is expressed in parasitized lepidopteran larvae, encodes homologues of Innexins, the structural components of insect gap junctions. Here, we have examined intracellular behaviors of the Campoletis sonorensis Ichnovirus (CsIV) Vinnexins, alone and in combination with a host Innexin orthologue, Innexin2 (Inx2). QRT-PCR verified that transcription of CsIV vinnexins occurs contemporaneously with inx2, implying co-occurrence of Vinnexin and Inx2 proteins. Confocal microscopy demonstrated that epitope-tagged VinnexinG (VnxG) and VinnexinQ2 (VnxQ2) exhibit similar subcellular localization as Spodoptera frugiperda Inx2 (Sf-Inx2). Surface biotinylation assays verified that all three proteins localize to the cell surface, and cytochalasin B and nocodazole that they rely on actin and microtubule cytoskeletal networks for localization. Immunomicroscopy following co-transfection of constructs indicates extensive co-localization of Vinnexins with each other and Sf-Inx2, and live-cell imaging of mCherry-labelled Inx2 supports that Vinnexins may affect Sf-Inx2 distribution in a Vinnexin-specific fashion. Our findings support that the Vinnexins may disrupt host cell physiology in a protein-specific manner through altering gap junctional intercellular channel communication, as well as indirectly by affecting multicellular junction characteristics. This article is protected by copyright. All rights reserved.

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