ヒドロキシキヌレニン活性を迅速かつ低コストで評価することができます

Fast and low-cost evaluation of hydroxykynurenine activity.

• Larissa G Maciel
• Janaína V Dos Anjos
• Thereza A Soares

抄録

3-ヒドロキシキヌレニントランスアミナーゼ（HKT）は、病気を媒介する昆虫のトリプトファン異化作用において重要な酵素として作用します。 HKTは、3-ヒドロキシキヌレニン（反応性窒素・酸素種の前駆体）をキサントウレン酸（安定で無毒な化合物）に変換する解毒酵素で、これまでに11の新規オキサジアゾール誘導体を合成し、HKTに対する非競合的な阻害活性を実証してきました。私たちはこれまでに11種類の新規オキサジアゾール誘導体を合成し、(https://doi.org/10.1016/j.bmc.2019.115252)からHKTに対する非競合的な阻害活性を実証してきました。これらの知見は、HKT触媒反応の基質と生成物が非常に近い波長（それぞれ370nmと369nm）で最大吸収を示すという事実を克服するための新しいアッセイに関する今回の技術報告書に付随する研究論文で紹介されています。以前に文献に記載されている方法は、吸光度定量の前にクロマトグラフィー分離に依存しており、阻害剤のスクリーニングへの使用が制限されています。殺幼虫化合物の分子標的としてのHKTの魅力的な特徴のために、我々は、組換えHKTの酵素活性を評価するための新しい、迅速かつ安価な方法をここに報告し、したがって、吸光光度計を介して潜在的なHKT阻害剤の迅速なスクリーニングを可能にする。本方法は、従来の方法と比較して、HPLCベースのアッセイに比べて、反応成分を分離するためのクロマトグラフィーカラムや溶媒の使用が不要であること、96ウェルプレートを使用しているため、サンプルの同時定量が可能であること、キサントウレン酸を生成物とするすべてのトランスアミナーゼに適用できること、などの利点がある。

The enzyme 3-hydroxykynurenine transaminase (HKT) acts as an important enzyme in tryptophan catabolism of disease-carrier insects, e.g. and . HKT is a detoxification enzyme that converts 3-hydroxykynurenine (a precursor for reactive nitrogen and oxygen species) into xanthurenic acid (stable and nontoxic compound). We have previously synthesized eleven new oxadiazole derivatives and demonstrated their noncompetitive inhibitory activity towards HKT from (https://doi.org/10.1016/j.bmc.2019.115252). These findings are presented in a research paper accompanying the present technical report on a new assay to overcome the fact that the substrate and product of the HKT-catalyzed reaction exhibit maximum absorption at very near wavelength (370 and 369 nm, respectively). The methods previously described in the literature rely on chromatographic separation prior to absorbance quantification, which limits their use for inhibitor screening. Due to HKT attractive features as a molecular target for larvicidal compounds, we report herein a new, faster and affordable methodology to evaluate the enzymatic activity of recombinant HKT, and therefore allow for the fast screening of potential HKT inhibitors via absorbance spectrophotometer. The advantages of the proposed methodology to previously described ones are:•It is faster and cheaper than HPLC-based assays because it does not require the use of chromatography columns and solvents to separate reaction components;•It uses of 96-well plates, enabling the simultaneous quantification of samples;•It can be applied to all transaminases that have xanthurenic acid as a product.

© 2020 The Author(s). Published by Elsevier B.V.