高分解能融解法を用いた多重リアルタイムPCRによる非結核性マイコバクテリア種の同定

Identification of nontuberculous mycobacteria species by multiplex real-time PCR with high-resolution melting.

• Aline Dos Santos Peixoto
• Lílian Maria Lapa Montenegro
• Andrea Santos Lima
• Fábio Lopes Melo
• Walter Lins Barbosa Júnior
• Maria Madileuza Carneiro Neves
• Jesus Pais Ramos
• Haiana Charifker Schindler
• Zulma Maria Medeiros

抄録

はじめに:

非結核性抗酸菌（NTM）種は，ヒトの病原体として世界的に増加しており，その正確な同定は困難となっている。鑑別診断，特にM. tuberculosis complexとNTM種との鑑別診断，およびNTM種の特徴づけが重要である。本研究では、ブラジル北東部の結核流行地域において、臨床的に重要なNTM種の同定と鑑別のために、高分解能融解（HRM）を用いたマルチプレックス・リアルタイムPCRに基づく分子システムの性能を評価することを目的とした。

INTRODUCTION: Nontuberculous mycobacteria (NTM) species, as human pathogens, are increasing in the world, as is the difficulty of accurately identifying them. Differential diagnosis, especially between the M. tuberculosis complex and NTM species, and the characterization of NTM species is important. This study aimed to evaluate the performance of a molecular system based on multiplex real-time PCR with high-resolution melting (HRM) for the identification and differentiation of NTM species of clinical importance of an endemic area for tuberculosis in northeastern Brazil.

方法は以下の通りです。:

分子システムの技術的プロトコールは、多重リアルタイムPCR-HRMに基づいており、研究対象地域から分離された結核菌の臨床分離株におけるNTM種の検出の感度と特異性を評価した。ゴールドスタンダード法は，特異的な遺伝子配列を用いた。

METHODS: The technical protocol of the molecular system was based on multiplex real-time PCR-HRM, and evaluated the sensitivity and specificity of the detection of NTM species in mycobacterial clinical isolates from the studied region. The gold standard method was specific gene sequencing.

結果:

NTMとM. tuberculosisの鑑別のために改良したマルチプレックスリアルタイムPCR-HRMの感度と特異性は，それぞれ90％と100％であった。NTM種（M. kansasii、M. abscesses、M. avium、M. fortuitum）の特徴づけに対するPCR-HRMの感度は、それぞれ94.59％、80％、57.14％、54％であった。

RESULTS: The sensitivity and specificity of multiplex real-time PCR-HRM modified for differentiation between NTM and M. tuberculosis were 90% and 100%, respectively. The PCR-HRM sensitivities for the characterization of NTM species (M. kansasii, M. abscesses, M. avium, and M. fortuitum) were 94.59%, 80%, 57.14%, and 54%, respectively.

おわりに:

多重リアルタイムPCR-HRM法は、臨床的に重要な非結核性マイコバクテリアを迅速かつ効率的に同定できる可能性がある。

CONCLUSIONS: The multiplex real-time PCR-HRM modified assay has the potential to rapidly and efficiently identify nontuberculous mycobacteria of clinical importance, which is crucial for immediate implementation of the appropriate therapy and thus avoiding complications and sequelae in patients.