歯科補綴物リライン材上のCandida albicansバイオフィルムの発生抑制剤としてのAmphotericin B、fluconazoleおよびnystatin。In vitroにおける解析モデル

Amphotericin B, fluconazole, and nystatin as development inhibitors of Candida albicans biofilms on a dental prosthesis reline material: Analytical models in vitro.

抄録

問題提起:

Candida albicansバイオフィルムを伴う義歯性口内炎の治療において，抗真菌剤の使用が示唆されている．しかし，付着およびバイオフィルム形成時に存在する時間，材料表面，基質が臨床治療にどのように影響するかは不明である．

STATEMENT OF PROBLEM: The use of antifungals has been suggested during the treatment of denture stomatitis associated with Candida albicans biofilms. However, how time, material surface, and substrates present during adhesion and biofilm development can influence clinical treatment is unclear.

目的:

本研究の目的は，吸着膜の影響を受けた検体表面におけるC. albicansバイオフィルムの増殖動態を調べ，抗真菌剤（amphotericin B，fluconazoleおよびnystatin）の抗バイオフィルム効果を評価することである。

PURPOSE: The purpose of this in vitro study was to investigate the growth kinetics of C. albicans biofilms on surfaces of specimens under the influence of adsorbed films and to evaluate the antibiofilm efficacy of antifungal agents: amphotericin B, fluconazole, and nystatin.

材料と方法:

シラガムコンフォートソフトリライニングの試料は、リン酸緩衝生理食塩水、人工唾液、牛胎児血清、人工唾液+牛胎児血清の前処理系に浸漬させた。浮遊性細胞を1.5時間インキュベート（リン酸緩衝生理食塩水＋検体）し（接着期）、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。その後、検体を（YNB+グルコース）8時間、24時間、48時間培養した（初期、中間、成熟期）。バイオフィルム無菌化最小発育阻止濃度は，Broth Microdilution法により測定した（7.81～500 μg/mL）．バイオフィルムの代謝活性は，比色分析により測定した（細胞代謝活性）．細胞生存率，相対的バイオマス（μm），バイオフィルムの厚さ（μm）は共焦点レーザー走査顕微鏡で評価した．

MATERIAL AND METHODS: Specimens of Silagum-Comfort Soft Relining were submerged in preconditioning systems: phosphate-buffered saline, artificial saliva, fetal bovine serum, and artificial saliva+fetal bovine serum. Planktonic cells were incubated (phosphate-buffered saline+specimens) for 1.5 hours (adhesion phase) and washed with phosphate-buffered saline solution. The specimens were then incubated (YNB+glucose) for 8, 24, and 48 hours (initial, intermediate, and maturation phases). The biofilm sessile minimum inhibitory concentration was determined by the broth microdilution method (7.81 to 500 μg/mL). The metabolic activity of the biofilms was tested by colorimetric assay (cell metabolic activity). Cell viability, relative biomass (μm), and the thickness of the biofilm (μm) were evaluated by confocal laser scanning microscopy.

結果:

牛胎児血清の存在下で最も高い生物活性が記録された。フルコナゾールとアンフォテリシンBで処理したバイオフィルムは，用量依存的に部分的に抑制された．Nystatinは主に≧15.63あるいは62.5μg/mLから代謝活性を阻害した。C.albicansのバイオフィルム形成において，生物学的パラメータ（非生細胞率）は一定であったが，バイオフィルムの発達段階により，大きさのパラメータ（相対バイオマス，厚さ）に変動がみられた．

RESULTS: The highest bioactivity was recorded in the presence of fetal bovine serum. Biofilms treated with fluconazole and amphotericin B were partially inhibited in a dose-dependent manner. Nystatin inhibited metabolic activity mainly from ≥15.63 or 62.5 μg/mL. Variations in magnitude parameters (relative biomass and thickness) were observed depending on the development phases of biofilms, whereas biological parameters (percentage of nonviable cells) were constant throughout the formation of C. albicans biofilms.

結論:

C.albicansのバイオフィルムの代謝活性は，時間，抗菌薬およびその濃度により，部分的（フルコナゾールおよびアンフォテリシンB）またはより効果的（ナイスタチン）な低下が起こることが示唆された。

CONCLUSIONS: The data suggest that partial (fluconazole and amphotericin B) or more effective (nystatin) reduction of metabolic activity of C. albicans biofilms occurred depending on the time and the antifungal and its concentrations.