シェーグレン症候群患者の小唾液腺組織における炎症性サイトカインとその遺伝子の発現に対するクルクミンのin vitro効果

In vitro effects of curcumin on proinflammatory cytokines and expression of their genes in minor salivary gland tissue of patients with Sjogren's syndrome.

抄録

クルクミンは、マウスモデルにおいて、疾患の重症度を下げ、ループス様/シェーグレン症候群様疾患を改善する。これらの効果の免疫学的基盤はほとんど知られていない。本研究では、原発性シェーグレン症候群（pSS）患者の小唾液腺から分泌される炎症性サイトカインに対するクルクミンの効果を検討した。小唾液腺（MSG）組織サンプルは、pSSの疑いで生検を受けている患者から採取された。この組織をフィトヘマグルチニン（PHA）単独、およびクルクミン（30μM）添加PHAで処理し、RPMI1640培地で37℃、48時間COインキュベータで培養した。培養期間終了後、培養上清と組織を冷凍庫（-80℃）に保存した。上清中のIL-6濃度はELISAキットで測定した。炎症性サイトカインであるIL-6, IL-8, TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-10, IL-17, IL-21, IFN-γの遺伝子発現はqPCRにより測定した。IL-6の分泌量と遺伝子発現をStudentのt検定により群間で統計的に比較した。47人の患者がスクリーニングされた。8人の患者がpSSのACR/EULAR基準を満たした。腺の炎症がなく、血清学的に陰性であった7人の患者が、シッカリとした対照を構成した。これら15人の被験者を最終解析に含めた。pSS グループでは、上清中の IL-6 レベルの中央値は、PHA 単独のサブセットと比較して、クルクミン処理では少なかった [5.5 (0.7-13.34) vs 18.3 (12-32)ng/ml; p=0.0156] 。 IL-6 の mRNA 発現レベルも、PHA 単独と比較して、患者と対照が一緒に分析された場合と、患者単独の場合でクルクミン処理試料では低かった (p=0. 0009 と p=0. 0078)．0009およびp=0.0078、それぞれ）。しかし、IL-1βのmRNA発現量は、症例と対照を一緒に分析した場合にのみ、PHA単独と比較してクルクミン処理した試料で低かった（p=0.0215）。その他のサイトカイン遺伝子の発現レベルには、体外実験条件下でサブセット間の差は見られなかった。結論として、クルクミンは、pSS 患者の唾液腺組織による IL-6 レベルの mRNA 発現および分泌を減少させました。クルクミンはまた、複合グループとして一緒に分析すると、pSS 患者およびコントロールの MSG 組織における PHA 誘発 mRNA 発現レベルの IL-6 および IL-1β を抑制した。

Curcumin reduces disease severity and ameliorates lupus-like/Sjögren's Syndrome-like disease in mice model. The immunological basis of these effects is largely unknown. This study examined the effects of curcumin on pro-inflammatory cytokines secreted by minor salivary glands in patients with primary Sjögren's syndrome (pSS). Minor salivary gland (MSG) tissue samples were collected from patients undergoing biopsy for suspected pSS. The tissues were treated with phytohemagglutinin (PHA) alone as well as PHA with curcumin (30 μM) and cultured in RPMI 1640 medium for 48 h at 37 °C in CO incubator. After the incubation period, culture supernatant and tissues were stored in the freezer (-80 °C). IL-6 levels were measured in supernatant by ELISA kit. Gene expressions of pro-inflammatory cytokines, namely IL-6, IL-8, TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-10, IL-17, IL-21, and IFN-γ, were measured by qPCR. IL-6 secretion levels and gene expressions were compared statistically between groups by Student's t test. Forty-seven patients were screened. Eight patients satisfied ACR/EULAR criteria for pSS. Seven patients with absent glandular inflammation and negative serology constituted sicca controls. These 15 subjects were included in final analysis. In pSS group, but not in controls, median IL-6 levels in supernatant were less in curcumin-treated as compared to PHA-alone subset [5.5 (0.7-13.34) vs 18.3 (12-32) ng/ml; p = 0.0156]. mRNA expression levels of IL-6 were also lower in curcumin-treated samples as compared to PHA alone, when cases and controls were analyzed together as well as in cases alone (p = 0.0009 and p = 0.0078, respectively); however, mRNA expression of IL-1β was lower in curcumin-treated samples as compared to PHA alone, only when cases and controls were analyzed together (p = 0.0215). There was no difference in other cytokine gene expression levels between the subsets under the in-vitro experimental conditions. In conclusion, curcumin reduced mRNA expression as well as secretion of IL-6 levels by salivary gland tissue of patients with pSS. Curcumin also suppressed PHA-induced mRNA expression levels of IL-6 and IL-1β in MSG tissue of patients with pSS and controls when analyzed together as a combined group.